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免疫胶体金快速检测技术 农业部饲料质量监督检验测试中心（西安） 培训资料 主要内容 一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、?-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向 培训资料 一、免疫胶体金技术的发展史 1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。 培训资料 4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。 5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver staining,IGSS）。 6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！ 培训资料 二、 胶体金的概念、原理及结构 1.胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。 2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuCl2-)，外层为H+，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形(大颗粒)。 培训资料 图1 金颗粒示意图 在溶液中金颗粒呈圆形,表面带有负电荷,由于静电的排斥力,使其在水中保稳定状态，形成稳定的胶体状态。 培训资料 3. 胶体金试纸条的构造 样品垫 PVC底板 层析方向 胶体金垫 测试线 （T线） 控制线（C线） NC膜（硝酸纤维素膜） 吸水滤纸 培训资料 4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心) 4.1（以HCG检测为例） 培训资料 4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应） （以吗啡检测为例） 培训资料 4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标） （以HIV检测为例） 阴性 阳性 培训资料 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用 采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。 规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。 培训资料 -------结果判定依据 阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测卡有效。 如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。 待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性 阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。 培训资料 四、?-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例 一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测卡才能检测到。 培训资料 二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管1个、干燥剂1片。 三、现场筛查步骤 1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。 2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。 培训资料 3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。 培训资料 4．结