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第六章 酶工程制药 本章重点: 产酶菌的要求； 酶和细胞的固定化； 本章难点：酶的人工模拟； 酶的化学修饰； 有机相的酶反应。 第一节 概述 一、酶工程简介 酶工程是酶学和工程学相互渗透结合发展而形成一门新的技术学科。它是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能，并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 ※二、酶的来源 目前工业生产酶制剂一般都以微生物为主要来源，原因： 1.微生物种类多，酶的品种齐全 2.微生物生长繁殖快，生产周期短，产量高 3.培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，经济效益高，可通过控制控制培养基来提高酶的产量。 4.微生物具有较强的适应性和应变能力。可通过各种遗传变异的手段，培育出新的高产菌株。 故目前工业上应用的酶大多采用微生物发酵法来生产。 三、酶的生产菌种 ※1.对菌种的要求 一个优良的菌种应具备以下几点要求： （1）繁殖快、产酶量高、酶的性质应符合使用要求，最好是产胞外酶的菌； （2）不是病原菌，也不产生有毒物质； （3）产酶性能稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体； （4）能利用廉价的原料，发酵周期短，易于培养。 2.生产菌的来源（了解） 生产菌种可从有关保藏机构获得，但大部分是从自然界中分离筛选得来的。 筛选的主要步骤： 菌样采集 菌种的分离初筛 纯化 复筛 生产性能鉴定 通过遗传学原理改良菌种的基本途径有：基因突变、基因转移和基因克隆。 3.目前常用的产酶微生物 工业上应用最广泛的产酶菌有： 大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。 四、酶在医药领域的应用（了解） 1.在疾病诊断方面的应用 包括两个方面：①根据体内酶活力的变化来诊断疾病；②用酶测定体液中某些物质的量诊断疾病。 2.在疾病治疗方面：酶作为药物作用于人体具有种类多、用量少、纯度高的特点。 3.在药物生产方面的应用：利用酶的催化作用将前体物质转化为药物。 4.在分析检测方面的应用：是以酶的专一性为基础、以酶作用后物质的变化为依据来进行的。 固定化酶：是被固定在某一有限空间内不再能自 由流动而仍有催化活性的酶。 优点： 不溶于水，易于与产物分离； 可反复使用，反应易于控制； 可连续化生产； 稳定性好。 缺点： 固定化过程中往往会引起酶的失活。 增加了生产的成本 只能用于水溶性底物，而且较适用于小分子底物 胞内酶必须经过酶的分离纯化过程 不适宜用于多酶反应 ⒊酶和细胞固定化方法 酶和细胞固定化方法 载体结合法 交联法 包埋法 网格型 微囊型 物理吸附法 离子结合法 共价结合法 热处理（细胞） 酶和细胞固定化模式 ①物理吸附法 使用对酶蛋白有高度吸附能力的硅胶、活性炭，氧化铝、高岭土、石英沙、火棉胶、多孔玻璃等在一定条件下与水溶酶作用制得。 这些具有吸附能力的物质就叫做载体。 优点：操作简单，反应条件温和，酶活力损失少，载体可反复使用。 缺点：易引起蛋白质表面变性，且由于结合力 弱，当反应液的pH值、离子强度、温度、底物浓度等发生变化时，会导致酶易从载体上部分或全部脱落。 ②离子结合法 利用含有离子交换基团的固相载体（如具有交换基团的葡聚糖凝胶或纤维素）与酶蛋白分子的带电基团互相吸引（靠离子链）而形成络合物。 第一个离子结合法固定化酶： DEAE — Cellulose 固定化过氧化氢酶 第一个工业化的固定化酶： DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶 ③共价结合法 酶蛋白的非必需基团通过共价键和载体形成不可逆的连接。一般在温和条件下能参与偶联的蛋白质基团包括：游离羧基（包括肽链C-末端的α-羧基等）、游离氨基（如肽链N-末端的α-氨基）等。 优点：此法制得的固定化酶，酶分子和载体间的 共价键较牢固，在介质组成发生改变和进行反应 时，都不会造成酶的脱落，因而可以反复使用。 缺点：制取固定酶较复杂，反应条件比较剧烈， 所以要制得酶活力很高的固定化酶较为困难。 制作方法：有重氮化法、烷基化和芳基化法、肽 法和戊二醛法等。 优点：利用此法制得的固定化酶，由于酶分子仅仅是被包埋起来，而未受到化学作用。酶蛋白几乎不起变化，可适用与多种不溶酶的制备。 缺点：酶被包埋在内