微生物处置机油污染废水研究.docVIP

微生物处理机油污染废水研究 　　 　　近年来，国内外对石油及兵产品的微生物降解研究常见报道，却鲜见机油废水微生物降解方面的研究。本试验目的是通过常规微生物驯化方法，以市售机油为唯一碳源，从油污土壤中分离筛选出机油高效降解菌株，并对其生长条件及降解特性进行研究，以期进一步应用于含油污水的治理。 1 材料与方法 1．1 土壤样品　　某石油库贮油罐附近的石油污染土壤，取样3份，按含油量由多至少编为1＃，2＃，3＃。1．2 培养基　　本试验选取两种无机基础培养基，（用蒸馏水配制并高压蒸气灭菌），编号分别为1＃，2＃，组成如下：　　1＃基础培养基：p（KH2PO4）＝0.5g／L，ρ（K2HPO4）＝0.5g／L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g／L，ρ（NaCl）=0.2g／L，p（CaCl2）＝0.1g／L，ρ（NH4NO3）＝1.0g／L，MnSO4痕量，FeCl3痕量。　　2＃基础培养基：p（NaNO3）=2.0g／L，ρ（KH2O4）＝0．2g／L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g／L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g／L．　　含油培养基是向上述无机基础培养基中加入适量机油。固体培养基中加入质量分数为0．2％的琼脂。1．3 优势菌筛分试验1．3．1 选择富集培养　　称取土样各10g，加入到500mL1＃含油培养基（含机油4mL）中，调pH值7.0，通气恒温30℃培养48h后，分别移取上述培养液5mL于45mL1＃，2＃含油培养基（含机油2mL）中，恒温30℃振荡培养。1.3.2 平板分离　　制作1＃，2＃固体含油培养基平板苦干，用接种环蘸取振荡培养较好的菌液在相应平板划线，恒温30℃培养48h后平板划线分离，重复数次。选择生长状况良好的菌株进行平板扩大培养。1．4 生长条件正交试验　　在保证供氧和氮、磷营养前提下，选择温度。油的质量浓度（以mg／L计）和pH值作为本次实验的三个因素进行三水平实验，方案见表1、表2。将平板培养48h的菌体刮下，5000r／min离心5min，分离得到湿菌体。向方案中每个样品加入0.5g湿菌体，培养60h后测定样品中油的质量浓度。 表1? ZL1菌株正交试验方案及试验结果 分组号 因素 测定结果ρ（油）/（mg.L-1) 降解测量ρ（油）/（mg.L-1) 温度/ ρ（油）/（mg.L-1) pH值 1 25 424 5.0 192 232 2 25 680 7.0 416 264 3 25 824 9.0 630 194 4 30 424 7.0 220 204 5 30 680 9.0 507 173 6 30 824 5.0 654 170 7 35 424 9.0 297 127 8 35 680 5.0 569 111 9 35 824 7.0 755 69 K1 690 563 513 　 　 K2 547 548 537 　 　 K3 307 433 494 　 　 K1 230 188 171 　 　 K2 182 183 179 　 　 K3 102 144 165 　 　 R 128 44 14 　 　 表2? ZL2菌株正交试验方案及试验结果 分组号 因素 测定结果ρ（油）/（mg.L-1) 降解测量ρ（油）/（mg.L-1) 温度/ ρ（油）/（mg.L-1) pH值 1 25 368 4.0 69 299 2 25 574 6.0 267 307 3 25 767 8.0 479 288 4 30 368 6.0 354 314 5 30 574 8.0 296 278 6 30 767 4.0 462 305 7 35 368 8.0 142 226 8 35 574 4.0 342 232 9 35 767 6.0 548 219 K1 824 769 766 　 　 K2 897 817 840 　 　 K3 677 812 792 　 　 K1 275 256 255 　 　 K2 299 272 280 　 　 K3 226 271 264 　 　 R 73 16 25 　 　 1.5 降解能力试验　　配制机油质量浓度为270mg／L的含油培养基1L，投入小型间歇反应器中，加入离心分离得到的湿菌体5g，通气恒温30℃培养，间隔12h取样测定其含油量。1．6 测试方法　　用紫外介光光度法测定。 2 结果分析 2．1 优势菌筛分试验　　富集培养过程中，1＃土样的培养液出现的泡沫较多，乳化现象明显，菌液也较为粘稠，分离出较多的菌株，说明土壤中的石油烃能刺激石油降解菌的生长。经过选择富集培养、平板分离出4株以机油为唯一碳源的菌株，编号为ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性状见表3。进一步培养后筛选出降解性能较好的ZL1（1