选修一生物技术实践选考内容生物技术在其他方面的应用主要.PPT

1．血红蛋白的提取 (1)红细胞的洗涤 ①目的：去除__________。 ②方法：采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用____________离心，然后用胶头吸管吸出上层透明的_______血浆，将下层暗红色的__________液体倒入烧杯，再加入五倍体积的__________稀释，再离心，重复洗涤三次，直至上清液中不再呈现_______，表明红细胞已洗涤干净。 (2)血红蛋白的释放 加蒸馏水(作用是__________________)到原血液的体积，再加40%体积的_______(作用是溶解细胞膜)，充分搅拌，细胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液 ①将搅拌好的混合液转移到__________中，以2 000 r/min的速度离心10 min后，可以明显看到试管中的溶液分为______层。 ②将试管中的液体用__________过滤，除去_______________，于__________中静置片刻后，分出下层的________________，即血红蛋白溶液。 2．血红蛋白的粗分离——透析 (1)原理：__________能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。 (2)过程：取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为__________)，透析12 h。 (3)目的：除去样品中___________________的杂质。 3．血红蛋白的纯化——凝胶色谱法 (1)原理：相对分子质量__________的蛋白质由于__________作用进入凝胶颗粒内部，路程__________，移动速度__________而被滞留；相对分子质量__________的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。 (2)过程 ①调整缓冲液面：打开色谱柱下端的流出口，调整缓冲液与凝胶面_______ ↓ ②滴加透析样品：关闭下端出口，用吸管小心将1 mL样品加到色谱柱顶端 ↓ ③样品渗入凝胶床：加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 ↓ ④再调整__________：关闭下端出口，小心加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液到适当高度 ↓ ⑤洗脱：打开下端出口，用磷酸缓冲液洗脱 ↓ ⑥收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集 4．纯度鉴定——电泳 判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。 在鉴定的方法中，使用最多的是___________________________。 判断下列说法的正误。 (1)纯化主要是根据蛋白质以及蛋白质与其他物质之间的理化性质的差异进行的(　　) (2)透析法可去除小分子化合物杂质，原理是不同分子所携带净电荷不同(　　) (3)通过控制离心速率，可使分子大小、密度不同的蛋白质沉降分层，从而分离不同的蛋白质(　　) (4)不同的物质在同一电场中的泳动速度不同，因此可用电泳法分离蛋白质(　　) (5)影响泳动速度的因素包括带电颗粒的性质、电场强度、溶液的pH等(　 ) 右图是用凝胶色谱法分离a、b两种蛋白质的示意图，请分析： (1)先从层析柱中洗脱出来的是哪种蛋白质？为什么？ (2)d是什么？有什么特点？ (3)层析柱装填时不能有气泡的原因是什么？ [提示](1)a蛋白质先洗脱出来，因为a的相对分子质量较大，被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。 (2)d是多孔板，蛋白质可以通过，凝胶颗粒不能通过。 (3)气泡会扰乱蛋白质的洗脱次序，干扰实验结果。 1．血红蛋白的提取和分离 (1)主要实验步骤及意义 (2)常用的蛋白质分离方法 ①凝胶色谱法 ②电泳法原理 a．在一定pH下，蛋白质分子的某些基团解离后带上正电或负电。在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 b．由于待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 2．比较琼脂糖凝胶电泳和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1)从载体上看，利用琼脂糖凝胶作为载体的是琼脂糖凝胶电泳，利用SDS—聚丙烯酰胺凝胶作为载体的是SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (2)从依据上看，利用了分子带电性质差异和分子大小的是琼脂糖凝胶电泳，仅利用了分子大小的是SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳。 (3)从优点上看，琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需处理，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好；SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳消除了净电荷对迁移率的影响，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 [高考警示] “血红蛋白的提取和分离”实验中的注意事项 1．红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时离心，否则会使白细胞等一同沉