RNA干扰Livin基因表达增强骨肉瘤MG-63耐药细胞对多柔比星的化疗.PDF

中国肿瘤生物治疗杂志 Chin J Cancer Biother, Dec. 2017, Vol. 24, No. 12 ·1375 · DOI：：10.3872/j.issn.1007-385x.2017.12.006 ∙基础研究∙ RNA 干扰Livin 基因表达增强骨肉瘤MG-63 耐药细胞对多柔比星的化 疗敏感性 1 2 1 1 孙廓 ，袁初平 ，李怀强 ，廖琦 （1.南昌大学第二附属医院 骨科，江西 南昌330006; 2.江西省都昌县中医院 骨科，江西 都昌 332600) [摘 要] 目的：研究凋亡抑制蛋白基因Livin 在逆转骨肉瘤耐药中的作用。方法：应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤 MG-63 细胞建立耐药细胞株，MTT 实验检测耐药细胞株的耐药指数，Western blotting 法检测MG-63 细胞和耐药细胞中Livin 蛋白 表达的差异。构建Livin shRNA 真核表达载体，应用LipofectmineTM 2000 转染至耐药骨肉瘤细胞中，Real-time PCR 和Western blotting 分别检测Livin shRNA 转染前后MG-63 耐药细胞中Livin 基因和蛋白表达的变化，流式细胞术检测细胞凋亡的变化，MTT 法检测对多柔比星化疗敏感性的变化。结果：成功构建重组质粒pSilencer3.1-H1 neo-Livin si 。诱导的耐药细胞MG-63/R 对多 柔比星的耐药指数为81.32±5.33 。Livin shRNA 可抑制MG-63 细胞中Livin 基因和蛋白表达，明显低于空白对照组和非特异性转 染组（分别下调72%和69% ，P0.05）。特异性转染Livin shRNA 组MG-63/R 细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组 [(22.4±3.2)% vs (4.2± 1.1)% 、(4.7±0.6)% ，P0.05] 。3 组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制，且呈明显的时间-效应 关系，但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组（P0.05）。结论：应用RNA 干扰技术下调Livin 的基因表达可有效促 进耐药MG-63 骨肉瘤细胞的凋亡，从而增加其对化疗药物的敏感性。 [关键词] 骨肉瘤；Livin 基因；RNA 干扰；多柔比星；耐药 [中图分类号] R738.1; R730.5 [文献标识码] A [文章编号] 1007-385X （2017 ）012-1375-06 Livin gene silence by RNA interference enhances the chemotherapeutic sensitivity of drug resistant MG-63 osteosarcoma cells to doxorubicin 1 2 1 1 SUN Kuo , YUAN Chuping , LI Huaiqiang , LIAO Qi （1. Department of Orthopedics, the Second Affiliated Hospi- tal of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi, China; 2. Department of Orthopedics, Duchang County Hos- pital of Traditional Chinese Medicine, Duchang 332600, Jiangxi, China) [Abstract] Objective:: To investigate the effect of Livin gene (an inhibitor of apoptosis protein) on reversing the drug-resistance of osteosarcoma. Methods:: Drug-resistant MG-63 cell strain was established in vitro by continuous exposure to doxorubicin