《海马血细胞的组织学研究》-毕业论文（设计）.docVIP

PAGE 学 士 学 位 论 文 鲁东大学学士学位论文 PAGE 1 海马血细胞的组织学研究 摘要：通过对从渤海湾捕捉的并且在实验室暂养6个月的6只日本海马（Hippocampus japonicus ）血液中的血细胞形态的观察、直径测量，及血细胞的分类等，探讨日本海马血液中有形成分的组织学特征。研究结果表明，日本海马的血细胞类型包括红细胞、单核细胞、淋巴细胞、颗粒细胞和血栓细胞。红细胞数量最多，占整个血细胞总数的97.99%。该研究可为以后日本海马的人工养殖过程中的免疫及防病等提供基础材料。 关键词：日本海马；血液；组织学；瑞氏染色 前言 日本海马 （Hippocampus japonicus ）在动物分类学上，属于脊索动物门、脊椎动物亚门、硬骨鱼纲、海龙目、海龙科、海马属 (Hippocampus)。海马是小型的海洋鱼类，其体形比较特殊，头似马头形状，所以被称为海马［1］。 日本海马体形相对较小，一般体长为60~80mm。躯干部体环为11节，尾部体环为37~38节。背鳍鳍条为16~17根，胸鳍鳍条为13根。体上骨环隆起，背侧棱棘相对较发达，其他棱棘均短钝或不明显。身体常蜷曲成一团，呈现出黑色。吻短，约为头长的1/3；活体日本海马背侧骨节突起处常有树枝状线体［2］。 海马是珍贵的药材，其药用价值在我国中药学典籍中早有记载，书中提到海马性温、味甘、无毒，具有强身补肾、舒筋活络、止痛止血、退热生肌、强心明目、祛痰止咳、妇人催生等功效。现代医学已经证明，海马的提取物具有激素样作用，有延缓衰老、抗血栓和镇静等作用。因此，海马在中医药上具有独到的特殊地位［3］。 海马的外形独特，数量稀少，世界各地水族馆、海洋世界、海洋生物公园等旅游、娱乐场所，都把海马作为水族的珍稀物，供人们观赏。把海马清洗干净、晒干，经细致加工后，仍能保持原有的形状和斑纹，美观华丽。可以作为装饰品使用。 目前海马的市场供不应求，而天然的资源却很缺乏，并且海马的资源也在日益衰退。目前急需进行人工养殖海马。而对海马进行养殖，首先要考虑的问题就是病害。海马病害要以预防为主［4］。海马养殖过程中，病害防治至关重要。海马病害的致病因素，包括生物因子，如细菌、病毒、寄生虫及藻类等；非生物因子，如溶解氧和光照等的异常变化等。同时，免疫在海马的病害预防过程中也有至关重要的作用。白细胞是免疫细胞，因此要更深一步的研究海马的病害问题，首先要先了解海马的血细胞的组成。本次研究可为海马的免疫研究提供一些基本的资料。 现如今在鱼类的血液组织学上做出研究的有陈刚研究的军曹鱼血液指标及血细胞发生的观察［5］，陈刚对军曹鱼血液研究表明军曹鱼白细胞约占血细胞比例为0.56%［6］。以及陈刚研究的美国红鱼的血细胞观察，陈刚对美国红鱼的研究表明美国红鱼血细胞中白细胞所占比例大概为1%［7］。尚没有对海马的血液组织学做出研究［8］，因此，这次研究是有意义的。 一、 材料与方法 （一） 材料 1. 实验材料 实验所用日本海马于2012年4月下旬从莱州三山岛捕捉并带回实验室，鲜活健康，无伤病。暂养于大鱼缸内。以卤虫、冰冻糠虾、海洋桡足类为饵料进行培养。分早上9：00和下午17：00一天两次进行投喂。模拟天然环境，鱼缸内放入供海马栖息的纤维，早上7：30给鱼缸照明，晚上9：00熄灯。一个月给海马换一次水，换水前将海水用漂白粉消毒，然后再用硫代硫酸钠中和后使用。 海马1、雌性：躯干长8.5cm，头长1.3cm，健康。 海马2、雌性：躯干长8.2cm，头长1.1cm，健康。 海马3、雌性：躯干长8.5cm，头长1.3cm，健康。 海马4、雌性：躯干长8.4cm，头长1.2cm，体侧皮肤生有大的白斑。 海马5、雄性：躯干长9.6cm，头长1.3cm，健康。 海马6、雄性：躯干长8.7cm，头长1.3cm，育儿袋变大。 2. 试剂与仪器 Wright染液：将瑞氏染料粉剂0.1g放入研钵体内，充分研磨，愈细愈好；然后逐步加入甲醇60ml，边加边研磨，直至染料全部溶解；最后装入试剂瓶中密封，放置7～30天后使用。 磷酸缓冲液（PB）：7.5mMol Na2HPO4·12H2O、2.5mMol NaH2PO4·2H2O和195mMol NaCl溶于400ml 12H2O中，配置成pH为7.2的磷酸缓冲液。 抗凝剂：加2%的NaCl用来调渗。 4%多聚甲醛的配制：取pH为7.2的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液100ml，加入100ml8%多聚甲醛，配成4%多聚甲醛。 实验试剂均为国产分析纯。 所用仪器有：荧光显微镜（OLYMPUS，型号BTX41TF） （二）方法 1. 日本海马血液抽取 取1只鲜活海马，用提前预冷和抗凝剂润湿过的注射器从日本海马的心脏处抽取血液，做血液涂片［9］。 2.日本海马血液瑞士染色观察