卵母细胞体外成熟机制及临床应用.pptVIP

卵母细胞体外成熟的机制与临床应用 主讲人：郑月慧 南昌大学江西医学院 2017年7月8日 一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其发展现状 二、卵母细胞体外成熟的机理及其调控三、卵母细胞体外成熟技术的优化和临床应用评估 我将从以下三个方面陈诉： 一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其发展现状 卵母细胞的体外成熟技术(IVM)是一项辅助生殖技术，简单地讲就是，将卵巢小卵泡中的未成熟卵子取出，放在模拟体内卵泡微环境的培养液中进行体外培养到成熟阶段，排出第一极体，再进行体外授精技术帮助受精，体外受精过程与体内成熟的卵子大同小异。 1、什么是卵母细胞的体外成熟技术？ 第三步： 胚胎移植 IVM Treatment 一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其发展现状 2、未成熟卵体外成熟技术的应用及其发展 上世纪九十年代，试管婴儿之父——爱德华兹先生就把卵母细胞体外成熟技术（IVM），作为辅助生殖技术未来发展的三大前景技术之一，其它两个技术是微刺激和自然周期试管婴儿技术。 近十余年来，IVM技术遍布全世界，对于一种不用或减少卵巢刺激，提高患者舒适度的治疗理念，人们一直在努力尝试更好的体外培养条件，以获得更高的成功率 一、卵母细胞体外成熟的定义、应用及其发展现状 3、体外成熟技术安全吗？ 这同样也是我们医护人员们最为关心的问题。 IVM出生的孩子遍布世界各地，目前全世界大概有5000～10000名体外成熟卵试管婴儿健康成长。其妊娠率可达到与体内成熟卵相当（35～50%）。结果表明，较其他辅助生殖技术，IVM技术并没有增加子代异常的风险 但是，毕竟卵母细胞体外成熟技术，将使卵子暴露于体外条件更长时间，理论上增加了卵子受培养环境影响的风险，在基因编程、表观遗传学、伦理学等方面，还需要更加深入的研究和探索。因此目前该技术只是适用于特殊人群，还没有普及到每一例试管婴儿 二、卵母细胞体外成熟的机理及其调控 与自然状态下和传统的IVF等辅助生殖技术中卵母细胞成熟方式不同，IVM未成熟卵母细胞的减数分裂在体外完成，该过程受如下多种因素影响： 1、取卵方式与时间 2、体外培养方法 3、IVM实施方案 1、取卵方式与时间IVM取卵方式：?直接从阴道采集 ?从手术切除的体外卵巢组织上采集 IVM的卵母细胞恢复能力受阴道采集时抽吸压力和针头型号的影响：较高吸取压力（大约为56 mm Hg）和较粗针头有利于卵母细胞恢复。有文献报道，将卵母细胞采集针反复在卵巢基质上抽吸的过程中逐渐增加抽吸压力，可采集到更多卵泡。 IVM取卵时间： 由于未成熟卵母细胞主要来源于小卵泡，所以取卵技术略不同于含有成熟卵子的大卵泡。取卵难度相对大一些，因为卵巢游动度较大，患者容易产生不适，所以一般都在麻醉下完成取卵。一般每个患者大约可以取到7～30余个不成熟卵子。 卵泡越小，卵母细胞恢复减数分裂进而发育成熟的能力越弱，但体积较大的优势卵泡可分泌大量雌激素而引起周围卵泡闭锁。因此，过早或过晚结束培养都会对卵母细胞的质量产生不利影响。目前，一般在卵泡直径达到10～12 mm时结束培养 100um 2、体外培养方法 体外培养方法可分为如下几类： 微滴（一维）培养 将卵泡直接放在培养皿中进行一维法培养时，不利于卵母细胞与其周围颗粒细胞之间的相互作用，且卵泡因重力作用而失去三维结构，进而影响卵母细胞生长 二维培养 利用颗粒细胞或STO细胞在培养皿底部铺饲养层可构建二维培养环境 三维培养 在海藻酸钠水凝胶等特殊材料包裹后，包埋培养可构造三维立体结构的卵泡培养环境 “两步法” 在三维培养环境中培养窦前卵泡至窦状卵泡阶段，随后去除部分卵泡，使细胞密度降低，从而促进卵母细胞生长，并最终获取成熟卵母细胞。 3、IVM实施方案 根据Gn使用情况，将IVM实施方案大致分为以下几种： ? 经典IVM方式 最早的IVM技术方案中不加入任何Gn。当卵泡直径达到10～12 mm而未形成优势卵泡时结束培养。该方案不仅适用于PCOS患者，还适用于排卵正常的个体 ? 添加卵泡刺激素（FSH）培养 FSH对卵泡发育和卵母细胞成熟十分重要，FSH水平不足或缺乏会影响排卵。在培养时加入小剂量FSH可增加获卵数、体外培养成熟率以及妊娠率。一般在体外培养的第3天加入100～150 U的FSH，连续3d至卵泡达到10～12 mm ? 添加人绒毛膜促性腺激素（hCG）培养 在培养时，加入hCG（一般为10000 U）有助于卵母细胞减数分裂的恢复，并能够增加妊娠率。 ? 联合使用FSH和hCG 当体外培养卵母细胞时，联合使用FSH和hCG可进一步提高获卵数、卵母细胞成