卷曲乳酸杆菌zj001 s层蛋白基因结构及没其表达产物的粘附和锚定功能研究.docx

目 目 录 摘要 ．．1 Abstract． ．．．．．．． ．． ．．． ． ．． ．． ．． ．． ．．． ．．． ．．．．． ．． ． ． ． ．．．． ．．4 第一部分文献综述 ．8 第一章乳酸杆菌的益生素作用及其在动物生产中的应用 ．9 1乳杆菌属的生物学特性 ．9 2乳酸杆菌的益生素作用及其机理 lO 2．1与病原体的生物拮抗作用 ．10 2．1．1与粘膜系统共建生理屏障，减少病原菌对上皮细胞的侵袭 ．．10 2．1．2对病原茵生长的拮抗作用 ．．11 2．2改善肠道微生物的生态环境 ．11 2．3免疫刺激作用 - 12 2．4促进消化吸收，提高饲料转化率 ．13 3乳酸杆菌在动物生产中的应用现状 13 3．1提高畜禽的生产性能 ．13 3．2消化道疾病的预防和治疗 ．13 4，J、结 ．14 参考文献 14 第二章乳酸杆菌S．层蛋白的结构、功能及其应用 20 1乳酸杆菌S．层蛋白的基本特征 20 2乳酸杆菌S．层蛋白基因 21 3 S．层蛋白基因在乳酸杆菌内的表达和调控 ．21 3．1启动子的结构特征 ．22 3．2 mRNA的稳定性 ．．22 3-3 S一层蛋白在乳酸杆菌内的表达 22 4乳酸杆菌S．层蛋白的结构和功能 23 4．1二级结构 ．24 4．2自我组装 ．24 4．3对细胞和细胞外基质的粘附作用 ．25 4．4在细菌外膜上的锚定作用 ．26 5乳酸杆菌S．层蛋白功能域的应用 26 5．1异源蛋白质的高效表达或分泌表达 ．27 5．2表面展示异源蛋白质和多肽 ．27 6，J、结 ．28 参考文献 参考文献 28 第二部分研究内容 36 第一章卷曲乳酸杆菌ZJ001分离株鉴定及其对病原菌的拮抗作用 37 l材料和方法 38 1．1菌株、细胞、质粒和引物 ．38 1．2主要试剂 ．．38 1．3基因组DNA提取 39 1．4 16S rRNA基因的PCR扩增、克隆和序列分析 39 1．5乳酸杆菌的体外生长试验 ．39 1．6对强酸和胆盐的抵抗力 ．40 1．7产酸能力和对病原菌体外生长的拮抗作用 ．40 1．8自身凝集 ．．40 1．9对绵羊和兔红细胞的凝集活性 ．40 1．10对HeLa细胞的粘附力 ．．40 1．11对病原菌粘附的竞争抑制作用 ．41 2结果和分析 41 2．1乳酸杆菌16s rRNA基因的同源性分析 4l 2．2体外生长特性 ．42 2．3对酸和胆盐的抵抗力 ．42 2．4产酸能力及对病原菌体外生长的抑制作用 ．44 2．5自身凝集和血凝活性分析 ．44 2．6对HeLa细胞的粘附力及对病原菌粘附的竞争抑制作用 46 3讨论 ．47 参考文献 48 第二章卷曲乳酸杆菌ZJ001的S．层蛋白及其对病原菌粘附的抑制作用 ．52 1材料和方法 53 1．1菌株和细胞 ．．53 1．2主要试剂 ．53 1．3乳酸杆菌表面蛋白的SDS．PAGE电泳分析 ．53 1．4卷曲乳酸杆菌ZJ001 S．层蛋白的提取及其多克隆抗体制备 53 1．5卷曲乳酸杆菌ZJ001 S．层蛋白在不同培养时间的表达 ．．54 1．6体外连续传代对卷曲乳酸杆菌ZJ001 s．层蛋白表达的影响 ．．54 1．7 LiCl处理对卷曲乳酸杆菌ZJ001体外生长特性的影响 ．．54 1．8 LiCl处理对卷曲乳酸杆菌ZJ001自身凝集、血凝活性和粘附力的影响 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．：j；。4 ．II． 1．9抗S．层蛋白抗体对卷曲乳酸杆菌ZJ001粘附HeLa细胞的抑制作用．．551．10 1．9抗S．层蛋白抗体对卷曲乳酸杆菌ZJ001粘附HeLa细胞的抑制作用．．55 1．10 LiCI处理对乳酸杆菌拮抗病原菌粘附HeLa细胞的影响 ．55 1．11卷曲乳酸杆菌ZJ001 S．层蛋白对病原菌粘附HeLa细胞的抑制作用．55 2结果与分析 56 2．1乳酸杆菌S一层蛋白的SDS—PAGE检测 56 2．2培养时间和体外连续传代对卷曲乳酸杆菌ZJ001 s．层蛋白表达的影响 ．56 2-3 S．层蛋白对卷曲乳酸杆菌ZJ001生长特性的影响 57 2．4 S．层蛋白对卷曲乳酸杆菌ZJ001自身凝集和血凝活性的影响 58 2．5 S．层蛋白对卷曲乳酸杆菌ZJ001粘附力的重要性 59 2．6 LiCl处理对乳酸杆菌拮抗病原菌粘附HeLa细胞的的影响 60 2．7卷曲乳酸杆菌ZJ001