聚精氨酸修饰的酸敏感脂质体的构建和三评价-药学专业毕业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 ；．-I ；．-I：lt：医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 虢监轹球师裤：州瑚学絮霉茹 一’、k一绣，∥ 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究生签名：j玛苘 聊獐硝 w修年≥月叩日 万方数据 目 目 录 中摘摘要 1 英文摘要 4 英文缩写 8 研究论文 引言 9 第一部分功能性脂材DSPE．PEG．Hz—CPP的合成 前言日IJ舌 ．．11．．1 l 材料与方法 ．．1 1 结果 ．．13 附图 ．．14 讨{仑 ．．16 小结 ．．16 参考文献 ．16 第二部分脂质体的制备和表征 前言刖舌 ．．11／．．1 材料与方法 ．17 结果 ．．19 附图 ．．20 附表 ．．22 讨论 ．．23 小结 ．．23 参考文献 ．．24 第三部分脂质体．细胞相互作用 前言日IJ舌 ．．2，．．25 材料与方法 ．．25 结果 ．．30 附图 ．．31 附表 ．．35 讨论 ．．37 万方数据 小结 小结 ．．37 参考文献 ．．37 结论 38 综述pH和离子敏感的聚合物在药物释放过程中的应用 ．．39 致谢 ．．51 个人简历 ．．52 万方数据 中文摘要聚精氨酸修饰的酸敏感脂质体的构建和评价 中文摘要 聚精氨酸修饰的酸敏感脂质体的构建和评价 摘 要 目的：‘ 肿瘤靶向制剂已成为近几年治疗癌症的研究热点，此种制剂可以将药 物尽可能多的输送到靶组织，进而发挥药物的治疗作用。脂质体具有类似 生物膜的结构，作为纳米给药制剂的一种非病毒载体，因其具有低的免疫 原性、低毒性以及靶向性等优点，已广泛作为肿瘤靶向制剂的重要载体。 但是，脂质体仍然存在体内易被网状内皮系统清除、稳定性差、摄取效率 低等问题，因此，设计一种修饰后的改良脂质体对生物大分子有效输送到 靶器官具有重要意义。 本研究构建了三种具有不同功能性脂材的PEG化脂质体：普通载药 脂质体NL、CPP修饰载药脂质体CL和含腙键CPP修饰载药脂质体CHL。 并对三种脂质体进行电位和粒径的表征，以MCF．7和A549细胞为模型 细胞，对不同脂质体与细胞作用特点进行考察。 方法： 1琥珀酰亚胺基．对甲酰基苯甲酸甲酯(SFB)和3．马来酰亚胺基丙 酸酰肼(MPH)分别制备储备液，充氮气，室温搅拌，旋蒸挥去有机溶剂， 得干燥的黄色固体S．M。 2自制的S．M与DSPE．PEG．NH2分别溶解，室温充氮气搅拌，得中 间体DSPE．PEG．Hz。 3取CPP样品管，室温平衡30min溶解，加入到DSPE．PEG．Hz溶液 中，充氮气，室温避光反应48h，旋蒸挥干有机溶剂，得黄色目标产物 DSPE．PEG．Hz．CPP。 4构建普通载药脂质体NL、CPP修饰载药脂质体CL和含腙键CPP 修饰载药脂质体CHL，并用马尔文粒度仪进行粒径和电位的表征。 操作方法如下： 分别以SPC／DC．chol／Chol／DSPE．PEG、SPC／DC．chol／Chol／DSPE． PEG／DSPE．PEG．CPP、SPC仍C．chol／Chol／DSPE．PEG／DSPE．PEG．Hz．CPP 为脂材旋转成膜，加DEPC水(含siRNA 3．75nm01)，手摇水化脱膜，水 万方数据 中文摘要浴超声，得半透明体系 中文摘要 浴超声，得半透明体系NL、CL、CHL。 5用流式细胞术和激光共聚焦显微镜分析经NL、CL、CHL处理的 MCF．7和A549细胞，流式分析以胞内平均荧光强度考察指标，评价细胞 摄取效率。激光共聚焦显微镜清楚地显示了三种制剂输送siRNA至细胞 中的位置。 6用激光共聚焦显微镜分析经CL、CHL处理的A549细胞，观察 siRNA是否从内涵体中逃逸，发挥基因沉默效应。 结果： l合成S．M：黄色固体粉末，质谱图中m／z=413．36，与S．M理论计 算值413．36(M+H+)相符，证明产物结构正确。 2合成DSPE．PEG．Hz：中间体平均离子峰为3 103．41，与理论设计肽 平均分子量相符，证明产物中有目标中间体。 3合成DSPE．PEG．Hz．CPP：产物平均分子离子峰为461 1．08，与理论 设计肽平均分子量相符，证明合成了目标产物。但是质谱图中可看到一个 平均分子量为2832．19的杂峰，为第二步的原料DSPE．PEG．NH2，产物合 成的方法以及纯化的步骤还需改进。 4载药普通脂质体NL、CPP修饰载药脂质体CL和含腙键CPP修饰 载药脂质体CHL粒径和电位测得结果如下： NL、CL、CHL的平均粒径分别为124．9nm、145．6