基走因工程和克隆技术.pptVIP

* 【注意点】限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 1.限制性核酸内切酶（限制酶） 2.DNA连接酶 ——E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶 【对位训练】限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： 【思考】（2）（7）和（3）（6）可以交换连接吗？ 可以接，但失去识别位 点，接后不能再切开。 【纠错】 某土壤农杆菌中的Ti质粒结构示意图（内含T-DNA片段） 3.载体（分子运输车） 此外，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等 4.基因工程的基本操作程序 直接分离 较小 DNA合成仪 RNA 逆转录酶 PCR 基因组文库；部分基因文库（如cDNA文库） ——PCR技术扩增 前提是：要有已知目的基因的核苷酸序列（以便根据这一序列合成引物） （2）基因表达载体的构建——基因工程的核心 ①目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 ②基因表达载体的模式图： 农杆菌转化法、基因 枪法、花粉管通道法 显微注射 技术 感受态细胞法 (用Ca2＋处理) 受精卵、体细胞 受精卵 原核细胞 【思考】若想将一个抗病基因利用“农杆菌转化法”导入单子叶植物，从理论上说应该怎样做？ 【转化】 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 【提示】①要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；②要加趋化（酚类化合物）和诱导的物质。 【归纳总结】 基因工程中受体细胞的选择问题解读： DNA分子 (核酸)分子 抗原—抗体 目的基因表达出的性状 5.基因工程的应用 （1） （2） 预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→推测脱氧核苷酸序列→合成DNA→表达出蛋白质 6.蛋白质工程 （1）流程图： 中心法则的逆推 （2）基因修饰或基因合成——第二代基因工程 7.植物细胞工程 植物细胞融合 植物组织培养 脱分化 再分化 避光，有光过早刺激分化 优点：克服远缘杂交不亲和的障碍。 （1）流程图 原理：细胞膜的流动性和细胞的全能性 （2）应用 ①微型繁殖：保优，高效快速，大量繁殖种苗。 ②作物脱毒：利用分生组织(如茎尖、根尖)进行培养。 ③人工种子： 注：人工种皮中可以加入适量 的养分、无机盐、有机碳源以 及农药,抗生素,有益菌等,以 利于胚状体生长发育成幼苗。 ④作物新品种的培育 单倍体育种 突变体的利用 细胞产物的工厂化生产 *