绝经后骨质等疏松症细胞外基质病因机理的分析.docx

中国协和医科大学博士学位论文英文缩写词表 中国协和医科大学博士学位论文 英文缩写词表 ALP alkaline phosphatase 碱性磷酸酶 Amp ampicillin 氨苄青霉素 Apes 3一aminopropyltriethoxysilane 胺丙基三乙氧硅烷 BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白 Col一1 collagen type I I型胶原 d Day 天 DEPC diethyl pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 E2 Estrodiol 雌二醇 EB Ethidiubromide 溴化乙锭 ECM extracellular matrix 细胞外间质 EDTA ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 HE hematoxylin—eosin 苏木素．伊红 h Hour 小时 HPLC high performance liquid 高效液相色谱 chromatography mln Minitue 分钟 MMP matrix metalloproteinase 基质金属蛋白酶 mRNA messenger RNA 信使核糖核酸 NBT nitrotetrazolium blue chloride 氯化硝基四氮唑蓝 OP Osteoporosis 骨质疏松症 PBS phosphate—buffered saline 磷酸缓冲液 PEG polyethylene glycol 聚乙二醇 PVP Polyvinylpyrrolidone 聚乙烯吡咯烷酮 “min round per minute 每分钟转速 RNase Ribonuclease 核糖核酸酶 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 S Second 秒 SSC sodium chloride，sodium citrate buffer 氯化钠柠檬酸钠缓冲液 TBE Tris—borate．EDTA buffer Tris．CI硼酸EDTA缓冲液 TE 1Hs．C1．EDTA buf佟r Tris，C1，EDTA缓冲液 Tris trishydroxymethylaminomethane 三羟甲基氨基甲烷 中国协和医科大学博士学位论文绝经后骨质疏松症细胞外基质病因机理的研究 中国协和医科大学博士学位论文 绝经后骨质疏松症细胞外基质病因机理的研究 研究生： 刘敬 导师： 许增禄 中文摘要 骨质疏松症(Osteoporosis，OP)是指以骨量减少，骨的微观结构退化为特征的致 使骨脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。绝经后骨质疏松症是其中最 重要的一种，由雌激素水平下降导致。f骨质疏松症以其发病普遍及后果严重而受到广 泛关注。世界发达国家用于骨质疏松症患者的医疗费用也逐年增加。在我国，骨质疏 松症正在危胁着越来越多的中老年人的身体健康。对其病因机理的研究有助于更好地 、 进行防治工作。心 ／ f对骨质疏松症最初的研究集中在钙平衡和调节骨代谢激素的病理生理学特征。后 来发现绝经后雌激素缺乏的重要作用。最近，才更多地关注了有机骨基质中特异的因 子和蛋白，其中一些被认为在骨形成和重建中发挥关键作用【1一】。在骨中，胶原组成 骨有机基质的90％，骨的稳定性和可塑性等基本特征归因于胶原，并赋予骨高度抗 张强度。胶原还提供矿盐结晶的基质，而矿盐结晶赋予骨高度抗压硬度。对胶原性骨 基质的研究是揭示骨质疏松症发病机理的重要途径。但有关这方面的研究很少报道。 因此，l芩实验采用组织化学、免疫组织化学、苦味酸天狼星红．偏振光法、原位杂交、 ／ 蛋白提取与纯化、高效液相色谱(HPLC)、分光光度法、细胞培养等多种方法深入 探讨了绝丝厦量厦琉松症中瞳匾挂置基魇的变化，并通过给骨质疏松症大鼠模型喂食 胶原性饲料反证堕亟蛋自的作用。 f首先以临床绝经后骨质疏松症患者因骨折而行股骨头置换术中弃置的股骨头区 为样本，以正常女性股骨头区为对照，应用组织化学、免疫组织化学、原位杂交方法 从蛋白到分子水平研究了股骨颈I型胶原及相关基质金属蛋白酶-1(MMP．1)的表达， 并以酶消化法提取和纯化了股骨头中的I型胶原，通过高效液相色谱(HPLC)测定 中国协和医科大学博士学位论文 中国协和医科大学博士学位论文 5 其肽链的羟基化程度．结果发现，绝经后骨质疏松症患者与正常对照组相比，I型胶原 纤维变细，排列紊乱，骨小梁穿孔、中断，哈弗氏系统改建活跃。另外，骨质疏松症 患者I型胶原免疫组织化学染色局部区域可见纤维走向不规则，成骨细胞阳性染色较 对照组加深，灰度扫描结果显示显著统计学差异(P0．05)，而表达I型胶原I