试验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌.DOC

实验一 常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1 学会常用器皿包扎方法 2 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3 学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管（test tube），德汉氏小管（Durham tube），玻璃吸管（glass pipette），吸器，微量加样器（micropipette），吸嘴（tip），培养皿（petri dish），三角瓶（erlenmeyer flask），接种铲（inoculating shovel），玻璃涂布器（glass spreader），接种环（inoculating loop），接种钩（inoculating hook），接种针（ inoculating needle），小塑料离心管（Eppendorf tube），滴瓶（dropper bottle），双层瓶（double bottle），酒精灯(alcohol burner），煤气喷头（coal gas sprinkler head），试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装 方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌（见无菌操作技术）。 方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装 准备好干燥的吸管，在粗头端塞入一小段棉花，以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。 将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，与报纸成45°角，左端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打个小结。 包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。或一起装入专用吸管筒进行灭菌。 如果一次可以用完，也可以将吸管直接装入筒内。尖端向内，使用时将筒平放在桌面上，手持粗端抽出。 3、试管和三角瓶的包装 试管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞，然后在外面用两层报纸包好，并用细线扎紧。若用铝箔更好，可以不用线扎。进行干热或湿热灭菌。 4、棉塞的制作： 棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好，所以好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全适合。 加塞时，棉塞长度的1/3在管口（瓶口）外，2/3在内。 一般用纤维长的棉花做塞子，不用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水变湿，造成污染。 此外，液体培养中还经常用到通气塞，即8层纱布重叠而成，或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。 四、玻璃器皿的清洗 新玻璃器皿：用2 %盐酸浸泡数小时后用自来水冲洗干净； 使用过的玻璃器皿：试管、培养皿、三角瓶等：用瓶刷沾去污粉等洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净；装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤； 玻璃吸管：使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内，以免干燥后不易清洗，再集中用自来水冲洗。 载玻片和盖玻片：滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾二甲苯擦去油，在肥皂水中煮沸5-10 min，用软布或脱脂棉擦拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡2 h，再用自来水和蒸馏水冲洗晾干后浸于95 %乙醇中备用。 注意：带菌的器皿在洗涤前用 2 %煤酚皂溶液或 0.25 %新洁尔灭溶液等消毒液内浸泡 24 h或煮沸 30 min，再洗涤； 带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌，然后倒去培养物，再洗涤。 五、培养基的配制与灭菌 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl 5g，琼脂15-20g，水1000 mL，pH 7.4-7.6。 1 称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2 加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。 3 调PH：检测培养基的PH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/L HCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4 过滤：液体培