《液相色谱仪的维护与保养》-课件设计（公开）.ppt

正确使用色谱柱(二) 色谱柱的在线保护装置 色谱柱的存放 启动液相色谱仪器的流程 常见问题分析 混合问题 问题： 一个有紫外吸收的流动相与一个没有紫外吸收的流动相动态混合产生噪音，增加静态混合器可以降低这种噪音。 缺点: 增加了死体积 + + 静态混合器 基线噪音 可能的原因： 检测池脏 检测池灯能量下降 由泵引起的脉冲 检测器上的温度效应 检测池中有气泡通过 Time (min.) 基线漂移 梯度洗脱引起的 温度不稳定（RID） 流动相脏 柱子没有用流动相平衡 系统中污染物溢出 鬼峰 20% - 100% MeOH 梯度洗脱没有进样 鬼峰－没有进样就有色谱峰出现。 原因－流动相脏 60 15 30 15 0 3 7 15 17 柱外扩展 用较短的、窄内径的毛细管连接进样器和色谱柱以及柱子和检测器。 确认连接管的接头都相互匹配。 使用死体积小的流动池 减小进样量 增加柱外死体积 峰形 柱头塌陷或柱床运动。 泵头过滤芯(Frit)部分堵塞。 组份共流出 1·双峰 正常 双峰 柱头塌陷 峰形 2·峰扩展 所有峰都扩展 柱效降低或有柱塌陷 进样体积过大 流动相粘度大 部分峰扩展 前一次分析样品的流出物 高分子量样品－蛋白质或聚合物 峰形 原因： 部分峰拖尾 正常 拖尾 正常 拖尾 二次保留效应 残留硅醇的相互作用 小峰在大峰后洗脱出来 3·拖尾 对称因子1.2 柱头有污染物堆积 重金属反应 所有峰均拖尾 柱外效应 柱子失效 峰对称 A B S = B A Excellent S = 1.0 - 1.05 Acceptable S = 1.2 Unacceptable S = 2 Awful S = 4 峰形 原因： 正常 前伸 柱子过载 4·前伸峰 小峰在大峰之前洗脱出来 对称因子 0.9 峰形 原因 正常 负峰 样品吸收比流动相吸收小。 5·负峰 溶解样品的溶剂通过柱子时平衡被破坏 RID中最常见 高效液相色谱的维护与保养 液相色谱仪器的使用及保养 样品准备 样品完全溶解在流动相中 样品没有完全溶解 过滤样品，确保样品中不含固体颗粒 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品 进样量尽量小 色谱泵的保养 流动相要过滤 常用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔 拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准 更换流动相时，要保证两种溶剂的互溶性,如不互溶，要用一种中间溶剂过渡. 例如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡 流动相的脱气 流动相脱气的目的 使色谱泵的输液准确 输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 保护色谱柱 减少死体积 防止填料的氧化 加热 简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成的变化 抽真空 同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果 超声波 简单，但效果不理想。 通惰性气体（一般用氦气） 可保持连续脱气，多用于低压梯度 在线脱气机 可保持连续脱气，多用于低压梯度 流动相脱气的方法 色谱泵的排气操作 ??使用前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按以下步骤排气： 将排液阀反时针转2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液 按以下方法之一将泵的后面放空 将U6K的C阀打开，或717设在PURGE状态 或，将参比阀打开 或，把色谱柱摘下 打开电源开关 开大流速到 6~9ml/min 同时用10ml注射器从排液阀注入流动相 直到泵后的流速稳定无气泡为止 色谱泵的运行 注意用外部控制器与用泵面板控制的区别 有些型号的外部控制器与面板不能同时用 如需要面板控制，需要断开控制线或关闭控制器 排气后的色谱泵即可运行 注意∶ 排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如∶进样器、色谱柱 如需要，恢复排气时断开的控制线 根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值 液相色谱对流动相的要求 除色谱柱对流动相的要求外，还有∶ 与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度 防止细菌的生长 Name Acetic Acid Acetone Acetonitrile Benzene Butyl Alcohol Carbon Tetrachloride Chloroform Cyclohexane Cyclopentane Dichloroethane Dichloromethane Dimethylformamide Dimethyl Sulfoxide Dioxan Ethylacetate Ethyl Alcohol Di-Ethylether Heptane Hexane Methyl Alcohol Methylethyl Ketone I-Octane Pe