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第八章 酶学通论 一、酶学研究史 19世纪中叶对发酵本质的探讨： 1857年 Pasteur认为发酵分几个阶段进行, 每一 步都有特定的酶参与, 但酶只在活体细胞中才能起 作用。发酵是酵母细胞活动的结果。 1897年 Büchner兄弟用酵母提取液实现发酵，证 明了酶可以离开细胞起作用。 酶的名称 1878年 Kühne提出enzyme一词：“在酵母中”。 1898年 Duclaux提出用后缀“ase”表示酶。 酶学研究史 酶促动力学 1894年 Fisher提出酶与底物作用的“锁钥”学说 1913年 Michaelis 和 Menton米氏方程建立。 关于酶的化学本质的认识： 1833年 Payen 和 Persoz从麦芽的水抽提物中用 酒精沉淀得到一种热不稳定物质,可使淀粉水解成 可溶性糖。 1926年 Sumner首次从刀豆中得到脲酶结晶，并证 明其化学本质是蛋白质。 1982年 Thomas R Cech从四膜虫发现rRNA的自身 催化作用，并提出了核酶（ribozyme）的概念。 限制性内切酶的发现 1970年 Restriction enzyme的发现→基因工程。 二、酶是生物催化剂 酶是一种催化剂 1.进行热力学上允许进行的反应； 2.缩短化学反应平衡到达的时间，而不改变反应的平衡点； 3.用量少而催化效率高； 2.高度专一性 3.可调控性 如酶浓度的调节、激素调节、反馈调节、 抑制剂和激活剂的调节、别构调节、酶的共 价修饰调节、酶原活化等。 4.反应条件温和 生物固氮： 工业氨合成： 5.酶的催化活力与辅酶、辅基和金属离子有关 酶是生物催化剂 1.生物体产生的；化学本质是蛋白质（直接、间接 证据）； 2.与生命活动密切相关。 全酶 (holoenzyme) || 酶蛋白（apoenzyme) + 辅助因子 （cofactor) cofactor 根据酶蛋白分子的特点将酶分成三类 单体酶（monomeric enzyme)：由一条肽链组成，全部参与水解反应。 寡聚酶 (oligomeric enzyme)：由几个或多个亚基组成，亚基牢固地联在一起，单个亚基没有催化活性。亚基之间以非共价键结合。大多为代谢调控酶。 （二）系统分类法及编号 1．分类: 根据催化反应的性质分6大类酶 1.氧化还原酶类 oxidoreductase 2.转移酶类 transferase 3.水解酶类 hydrolase 4.裂合酶类 lyase 5.异构酶类 isomerase 6.连接酶类 ligase/synthetase （2）几何异构专一性 延胡索酸酶：作用于反式的丁烯二酸 七、酶的分离纯化和活力测定 酶活力（enzyme activity）是指酶催化某一化学反应的能力。 酶活力单位（ U ） ：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量（U/g，U/ml） 。 在最适的反应条件（25℃）下，每分钟内催化一微摩尔底物转化为产物的酶量定为一个酶活力单位，即 1IU=1μmol/min 在最适条件下，每秒钟内使一摩尔底物转化为产物所需的酶量定为1kat单位，即 　　　　　　1kat=1mol/s 酶的比活力 （代表酶的纯度）：每mg蛋白质所含的酶活力单位数。 酶的保存 低温（0~4℃，-20℃）；高浓度较稳定；加入稳定剂；固定化。 最后一步纯化过程得到的酶液，需经浓缩或结晶以及其它处理，以便于保存。在合适的条件下，酶一般可保存较长的时间。 在4℃下，可将酶悬浮在浓硫酸铵或PEG溶液中保存，10 mg/ml 的浓酶液可加入25%～50%甘油保存。可将酶液过滤除菌，以减少微生物降解作用。 冷冻干燥（0~4℃）保存，避免反复冻溶。 七、核酶（ribozyme) 1982 Thomas R Cech从四膜虫发现rRNA的自身催化作用，并提出了核酶（ribozyme）的概念。 核酶的种类 　催化分子内反应（自我剪接和自我剪切） 　催化分子间反应（L19RNA、RNaseP) 核酶的研究意义 　　　　　　　　　 八、抗体酶（abzyme) 抗体：与抗原特异结合的免疫球蛋白。 既是抗体又具有催化功能的蛋白质称为“