荔枝核总黄酮阳对肝纤维化大鼠肝脏p300cbp蛋白表达的影响.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立 原创性声明 本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立 进行研究所取得的成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的 成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内 容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对 本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式 标明。 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：兰鍪鱼 日 期： 珥 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广西中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许 论文被查阅和借阅。本人授权广西中医药大学可以将学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。 (保密论文在解密后遵守此规定) 论文作者签名： 至基堑 导师签名： 日 期：耻-n卑一日期： 万方数据 荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝脏p300／CBP 荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝脏p300／CBP 蛋白表达的影响 中文摘要 目的：、研究荔枝核总黄酮(Total Flavone from Litchi Chinensis Sonn，TFL)对二甲基亚硝胺(Dimcthylnitrosamine，DMN)肝纤维化大 鼠肝细胞凋亡机制TGF．13／Smads信号通路中p300、CBP和Smad3蛋白表 达的影响及其与肝纤维化程度的相关性。 方法：将SPF级雄性SD大鼠90只，随机分为空白对照组、肝 纤维化模型组、秋水仙碱组、吓L高剂量给药组(200mg／kg·d)、ⅡL中 剂量给药组(100mg／kg-d)，ⅡL低剂量给药组(50mg／kg·d)，每组各 15只。以DMN腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型，造模同时分别以秋水 仙碱、高、中、低剂量的TFL灌胃进行干预治疗，空白对照组及肝纤维 化模型组分别以生理盐水(5ml／kg)灌胃进行对照。6周后处死大鼠，各 组取大鼠肝组织标本，HE及Masson染色观察肝纤维化严重程度，实时 荧光定量PCR检测Smad3 mRNA表达变化，免疫组织化学染色检测 p300、CBP、Smad3表达变化，Western blot定量测定p300、CBP表达变 化。 结果：1)病理组织观察：大鼠肝纤维化造模成功，肝纤维化半定量 评分提示TFL高中低剂量组和秋水仙碱组肝纤维化半定量评分较模型组 低(p0．01)，TFL高中剂量组较秋水仙碱组肝纤维化半定量评分低 (必O．05)，但TFL低剂量组较与水仙碱组相比，肝纤维化半定量评分无 显著差别(p0．05)，差异无统计学意义。2)Smad3测定：免疫组化结果 显示模型组Smad3显色指数评分显著高于空白对照组仞0．01)，TFL高、 中、低各组和秋水仙碱组较模型组Smad3表达均有所减少pO．01)；与秋 水仙碱组比较，TFL高、中剂量组Smad3表达较低pO．05)；TFL低剂量 万方数据 组Smad3表达较秋水仙碱稍低，差异无统计学意义(p0．05)；3)qPCR 组Smad3表达较秋水仙碱稍低，差异无统计学意义(p0．05)；3)qPCR 结果显示，模型组Smad3的表达较空白对照组明显升高pO．01)；药物干 预的TFL高、中、低组和秋水仙碱组Smad3表达较模型组显著降低 仞0．01)，与秋水仙碱组比较，吓L各剂量组Smad3表达较低p0．05)；4) p300、CBP测定：免疫组化染色显示：p300／CBP蛋白主要在肝窦、汇管 区附近细胞的细胞质及细胞核中分布，但以分部在细胞核中为主。相对 于空白对照组，模型组p300／CBP表达明显升高po．01)；与模型组比较， ⅡL高、中、低剂量组和秋水仙碱组p300／CBP表达明显减弱(庐0．01)； 与秋水仙碱组比较，吓L高、中剂量组p300／CBP表达较低p0．05)；TFL 低剂量组降低p300／CBP表达的作用较秋水仙碱组优势并不明显。Western blot结果显示，空白对照组大鼠肝组织中p300／CBP仅少量表达；模型组 大鼠肝脏中p300／CBP大量表达，较空白对照组明显升高(p0．01)。其余 各组表达与免疫组化结果基本一致；5)相关性：肝组织p300、CBP和 Smad3蛋白的表达与肝纤维化程度呈正相关，相关系数分别为r=0．888， r=0．880，r=0．875(p0．01)。 结论：高、中剂量的TFL具有良好的抗肝纤维化作用，其抗肝纤 维化作用机制可能与其抑制p300／CBP、Smad3蛋白表达，进而影响 TGF．13／Smads信号通路转导作用，从而促进肝星状细胞凋亡有关，且肝 纤维化程度与p300／CBP、Smad3