医用分子遗传学dn卜a复制.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 大肠杆菌基因组复制起始部位 3、酿酒酵母起始部位顺序特征 A: 含ARS一致序列（ACS），复制起始识别复合物结合 B：增加复制起始位点的效率 100－200bp 4、 SV40起始部位的顺序特征Simian vacuolating virus 40 猴空泡病毒 5211 5220 5230 5240 1 10 20 30 CACTACTTCT GGAATAGCTCAGAGGCCGAGGCGGCCTCGGCC TCTGCATAAAT AAAAAAATTA GTGATGAAGACCTTATCGAGTCTCCG GCTCCG CCGGAGCCGGAGACGTATTTA T TTTTT TAAT 反转重复序列 大T抗原结合部位 II A/T 富含区 图3-7 SV40 复制起始部位结构 复制起始位点特征： 独特重复序列 起始结合蛋白识别 AT富含序列，有利于DNA双链解旋 5、起始部位的顺序特征（高等真核生物） 多个复制起始点，有人发现任何大于15kb的DNA就能自主复制。 起始不是随机的，但未发现起始位点的特征序列。 特征：结合复制相关蛋白 一个细胞周期复制一次 不同细胞复制起始位点的应用存在差异 （二） 起始需要多种蛋白因子参与 1 噬菌体（?X174） priA 识别起始位点，ATP酶活性 priB 起始引发 priC 起始引发 DnaT 起始引发 DnaB 起始引发 DnaC 起始引发,与DnaB一起作用 DnaG RNA引物合成 2 大肠杆菌 DnaA 识别并结合于oriC区，有ATP酶活性，使AT富含区解链，促进DnaB结合形成起始复合物。 DnaB DNA螺旋酶，有解旋和解链作用。 DnaC 运输DnaB，形成起始复合物。 DnaG DNA复制引发酶，合成引物。 Hu 促进复制复合物的形成。 回旋酶 松弛正超螺旋，促进单链DNA产生。 单链结合蛋白 促进DNA解链，稳定单链DNA。 n’ site, primosome assembly site, n’-pas 3、真核细胞（SV40） 真核细胞（SV40）的DNA复制至少需要6个蛋白因子参与。 T抗原：N端为DNA结合区，识别起始位点，C端具有螺旋 酶活性，在RFA的协助下解开双链。 SV40 编码 RFA：人单链结合蛋白 拓补异构酶I或II：解开超螺旋。 复制因子C（replication facter C, RFC）：形成起始复合物 DNA聚合酶α-引物酶复合物：合成引物，起始DNA合成。 4、真核细胞（Yeast） （1） ORC（ Origin Recognition Complex） 6个亚基组成 在真核生物中相当保守 特异识别ARS （Autonomously replicating sequence） ORC1p，ORC2p，ORC4p 与A 元件结合， ORC5p与B元件结合 结合过程需要ATP （2） Cdc6/Cdc18 （3）微染色体支持蛋白（Minichromosome maintenance proteins，MCMp） 与DNA发生周期性的作用，与复制叉运动有关。 （4） Cdc45 与DNA复制起始位点相互作用。 （三）复制的起始－－引发（Priming） 合成RNA引物的过程 单链结合蛋白SSB与M13噬菌体单链DNA结合，在发夹结构前6 bp处，RNA聚合酶合成 20~30个碱基的RNA. 破坏发夹结构；SSB结合；DNA聚合酶III在3’－OH延长DNA链。 DNA聚合酶I水解RNA，并补平缺口，连接酶连接。 1、M13噬菌体 priA,priB,priC识别起始点 在DnaT帮助下DnaB,DnaC复