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3）DNA的熔解曲线(melting curve) ①熔解温度（melting temperature, Tm ） 通常将 50% DNA 分子变性时的温度 称为熔解温度。 ** 一般DNA在生理条件下 Tm 在 85-95oC之间 * DNA的熔解曲线 * (2) 影响Tm的因素 Ⅰ. DNA的碱基组成 （G＋C）％↑Tm↑ （G＋C）％每增加1, Tm线性增加0.41℃ （G＋C）％为40％，Tm为87℃ （G＋C）％为60％，Tm为95℃ * Ⅱ.介质中的离子强度 盐浓度↑Tm↑, 变性过程跨越的温 度范围更狭窄 , 如单价离子浓度增 加10倍, Tm增加约16.6 ℃ Ⅳ. 变性剂 50％甲酰胺可使Tm降低30℃ Ⅲ. DNA的均一性 * 离子强度对Tm的影响 * 2. 复性 (renaturation) (1) 概念： 变性的两条DNA单链在合适条件下，可按原来的碱基配对再结合在一起，形成双螺旋结构。 * 退火（annealing）: 加热变性的DNA分子在温度缓慢 降低时可恢复到原来正常DNA的结 构, 这个复性过程又称“退火” * * 图3-26 DNA热变性过程的两种冷却过程示意图 * (2) 影响DNA复性因素 1） DNA序列 简单序列 复性快 2） DNA浓度 浓度高 复性快 3） DNA片段大小 小片段DNA易于复性 * 4） 温度 复性最佳温度为Tm-25℃（一般为 60℃，50％甲酰胺存在最佳温度42℃） 5） 溶液中离子浓度 盐浓度需在0.4mol／L 以上 * 3. 杂交（hybridization） 1) 概念: 不同来源但具有同源性的 两条DNA或RNA单链， 按碱基配 对的原则结合，这一过程为杂交， 可以是 DNA-DNA、RNA-DNA、 RNA-RNA之间进行。 * * 2) 核酸分子杂交常用的技术 ① Southern印迹分析法 1975年英国科学家 Southern 首先 提出并利用此方法检查基因组DNA 的特异序列。 ② Northern印迹分析法 根据Southern法的基本原理，分 析检测RNA 。 * ③ 斑点杂交 ④ 细胞原位杂交 ⑤ 菌落或噬菌斑原位杂交 3). 分子杂交的探针 ??????①?概念: 探针是分子杂交的必要工具， 它是带有某种标记的一段碱基序列， 与待测基因序列的DNA或RNA或寡 聚核苷酸互补。 * ② 探针的标记 ⅰ）放射性同位素标记 如用32P、35S、3H ⅱ）非放射性标记 主要有生物素标记、 地高辛标记 * * Cancer immunotherapy, Sciences Breakthrough of 2013, continues to surge as clinical researchers amass evidence that the immune system can be a powerful ally against tumors. One big focus now is mixing and matching treatments: combining two novel immunotherapies, for example, or an immune strategy with a targeted drug, radiation, or chemotherapy. Dozens of clinical trials are under way—ranging from a phase I study in melanoma that combines the recently