卵巢癌耐药铜离子转运蛋白hctr1相关是mir.docxVIP

中文摘 中文摘 要 目的 ：筛选 铜 离子 转运 蛋 白 hC T R l 相关 的 m iR N A ，探讨此类 m iR N A 是 否通 过 铜 离 子 转 运 蛋 白 h C T R l 参 与 卵 巢 癌 顺 铂 耐 药 。 方法 ：通过 生物 信 息学数据库及 已发表 的文献 ，初步筛选 与 hC T R l 及 卵巢癌 铂类 耐 药相 关 的 m iR N A s; R eal T im e-P C R 和 W estern B lot 在 卵巢 癌 及 其 耐 药 细 胞 株 中 验 证 初 步筛选 m iR N A 与 hC T R l 表 达 的相 关 性 ；上 调 或下 调 初 步 筛 选 的 m iR N A ， 免 疫 荧 光 定位 ，流 式 细 胞 术 定 量 分 析 m iR N A 对 hC T R l 表 达 的调 控 作 用 ；通 过双 荧 光 素 酶 报 告 基 因验 证 h C T R l 的 3 ’U T R 中是 否 包 含 筛 选 m iR N A 的直 接 作 用位 点 ； 电感 耦合 等 离 子质 谱 法 （IC P -M S ) 测 定 m iR N A 表 达 与细 胞 内铂 含 量 的相关 性 。 结果 ：通 过检 索 发现 ，m iR -206 可 能与 卵巢癌 耐 药可 能相 关 ， 同时也与 hC T R l 的 3 U T R 中两 处序 列互 补 ；m iR -206 在 卵巢 癌 细胞 中与 hC T R l 基 因及 蛋 白表 达 呈 负 相 关 ；与其他 初 步筛 选 的 m iR N A 相 比，m iR -206 对 hC T R l 表 达 的调 控 最 为 明显 ； A 2780 卵 巢 癌 细 胞 中转 染 m iR -206 拟 似 物及 抑 制 物 发 现 ，m iR -2 06 表 达 水 平 影 响 hC T R l 基 因及 其 蛋 白的表 达 ；通 过 双 荧 光 素 酶 报 告基 因实验 发 现 ，m iR -206 能够 特 异 性 结 合 hC T R l 3 U T R 的种 子 区 域 ， 降低 m R N A 的表 达 ，最 终 下 调 h C T R l 蛋 白 表 达 ； 同时 IC P-M S 对 细 胞 内铂 含 量 的测 定表 明 ，上 调 m iR -20 6 能 够 减 少 A 2 780 细 胞 对 顺 铂 的摄 入 。 结论 ：m iR -206 可 以调节 hC T R l 基 因及 蛋 白的表达 ，并降低 卵巢 癌 细胞株对顺 铂 的摄 入 能力 ，推 测 m iR -2 06 通 过 hC T R l 参 与 卵巢 癌铂 类 耐药 。 关键 词 ： m iR N A ；hC T R l；卵巢癌 ；顺 铂 ；耐药 中 图分类 号 ：R 7 1 复 旦 复 旦 大 学 硕 士 毕 业 论 文 A b s tr a c t O bjective ： T o screen the h C T R l related m iR N A ; and con firm w h ether m iR N A is invo lv ed in cisp latin resistan ce o f ov arian can cer thro ugh hC T R l. M eth od s：m iR N A s,associated w ith hC T R l an d drug resistance,w ere selected firstly by search in g b io-data b ases and p ub lish ed articles. T h en ，m iR N A s and hC T R l w ere con firm ed in ov arian can cer cell lin es an d th e p aired cisplatin resistan ce cells b y R eal? tim e P C R an d W estern B lot. R eg ulatory function of target m iR N A to h C T R l ex p ression w as inv estigated u sing tan sfectio n of m iR N A m im ics o r in hib itor. L u ciferase assay w as used to identify if the function o f m iR N A is activ atin g throu