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第七章 免疫学技术 7.1 血清学技术 (非标记免疫分析技术） 7.2 标记免疫分析技术 7.3 单克隆抗体技术 7.4 基因工程抗体技术 7.5 其它免疫学技术 概 论 免疫学技术是指对抗原、抗体在体外所作的各种 反应实验及抗体的制备技术。 免疫学技术的特点: 1、高度特异性（专一性）； 2、高度灵敏性（可达到 10-9g、10-12g、10-15g水平）； 3、方法标准化、自动化； 4、试剂商品化。 1、医学上的应用 A、诊断：人类各种传染病的诊断：如各型肝炎，艾滋病、梅毒、 SARS 、炭疽病菌等；各种肿瘤的诊断；妊娠、血型、法医血痕诊断。（凝集实验、康氏试验(絮状沉淀) 、间接凝集抑制试验、 ELISA 、 ELISA-PCR 、 Western blot 、免疫荧光方法、免疫传感器和抗体芯片等）。 B、预防、治疗：传染性疾病的免疫预防和治疗；肿瘤的免疫预防和治疗；免疫缺陷和自身免疫性疾病预防和治疗等。如制备疫苗（基因工程疫苗）进行预防和治疗。预防性抗体（如肌注人丙种球蛋白预防传染性肝炎，麻疹等病毒性疾病），抗体靶向治疗肿瘤（如单克隆抗体，基因工程抗体）。 2、动物检疫检测中的应用 免疫学技术在动物检疫上主要应用于检测抗原及动物性流行病调查中检测特异性抗体。检测范围非常广泛，常见的主要有禽病诊断中病毒的检测，如禽流感病毒、鸡痘病毒、禽腺病毒等；猪的流行性腹泻病毒、猪囊虫；牛的口蹄疫、疯牛病等。如采用酶免疫测定法，Western blot。 3、植物病毒检测中的应用 免疫学方法已被植物病毒学家广泛应用于植物病毒的检测，病毒病的普查、口岸和产地检疫等。如ELISA方法,具有灵敏度高快速等特点。 4、生物学上的应用 A、物种的分类鉴定：动物、植物、微生物的鉴定，品种品系、血清型；各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同，物种种源越远，抗原性差异越大，可用区分抗原性的血清学反应，进行包括微生物在内的物种鉴定、物种的分类等。 B、分子生物学研究领域：在基因工程中，基因的分离、克隆、筛选、表达产物的定性与定量分析、表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如免疫印迹，免疫亲和层析等免疫分析和分离技术。 C、建立血清库 用于各种生物资源及生态分布的调查,如:各种植物病源菌、根瘤菌、苏云金杆菌等（用到荧光抗体标记测定技术）。 5、食品、药品的检测 用于食品中微生物的检测，如用ELISA方法检测食物中毒的病原菌，如沙门氏菌、霉菌；食品中毒素如黄曲霉毒素的检测；食品中残留农药的检测；抗哮喘的药物如茶碱、抗生素如庆大霉素的检测。 6、在环境保护中的应用 采用夹心免疫法，免疫生物传感器检测 污染物。另外，利用固定化的单链抗体处理 污染物。 7.1 血清学技术 (非标记免疫分析技术） 7.1.1 血清学技术分析的目的 1. 用已知抗原检测未知抗体 2. 用已知抗体检测未知抗原 3. 用已知抗体检测某些药物、激素等各种半 抗原 7.1.2 影响血清学反应的因素 1.内在因素-抗原抗体的性质 抗原抗体反应的整体强度受3个因素控制： 1) 结合力 2) 特异性 3) 结合价 其中结合力和特异性是反应的关键因素。 1)Ag、Ab的分子间非共价键的相互作用（结合力）：盐键(静电引力)、氢键结合力、疏水作用力和范德瓦尔力。 2)特异性:抗原抗体反应的专一性，这是抗原表位（抗原决定簇）与抗体超变区中抗原结合点之间，化学结构和空间构型上呈互补关系。如果两个抗原有相同的抗原表位-交叉反应。 3)结合价：Ag为多价，Ab为二价或二价以上。多价才形成网状结构的凝聚物。 2.外在因素 1) Ag和Ab的结合比例 Ab过剩，反应不可见，前带现象 Ag过剩，反应不可见，后带现象 Ag和Ab比例合适，反应可见 等价区 抗原抗体的结合比例 7.1.3 血清学分析技术主要内容 1. 沉淀反应（precipitation) 2. 凝集反应 (agglutination) 3. 补体结合试验（complement fixation test） 4. 中和反应（neutralization）  7.1.4 沉淀反应(precipitation) 原理：可溶性抗原与相应抗体混合后，在适量的电解质存在的条件下发生特异性结合，形成抗原抗体复合物并出现可见的反应（沉淀或沉淀线）的过程。 沉淀原：参加反应的可溶性抗原。 沉淀素：参加反应的抗体。 可溶性抗原：抗原分子较小，如蛋白质、多糖、类脂、细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解