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检样 稀释处理 EMB等 革兰氏染色 乳糖发酵管 革兰氏阴性无芽胞 产气 革兰氏阳性 大肠杆菌阴性 大肠杆菌阴性 报告 不产气 乳糖胆盐发酵管 产气 不产气 大肠杆菌阴性 报告 报告 报告 大肠杆菌阳性 1:100 1:10 各加入1ml 各加入10ml 各加入1ml 单料乳糖胆盐发酵管 单料乳糖胆盐发酵管 双料乳糖胆盐发酵管 初发酵 检样稀释 检样量1g/ml 检样量0.1g/ml 检样量0.01g/ml EMB 分离培养 证实试验 乳糖发酵管 镜检 查MPN表报告结果 表1 粪大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征 培养基 菌落特征 伊红兰培养基(EMB) 紫黑色、有金属光泽，紫黑色、不带或略带光泽，淡紫红色、中心紫黑色、黑红或深紫红色 品红亚硫酸纳(远藤氏平板) 紫红色、有金属光泽，深红色、不带或略带金属光泽，淡红色、中心较深 中国兰平板 深蓝色，浅蓝色、中心深蓝色 麦康凯平板(Mac C) 桃红色，粉红色、中心桃红色 MPN法简介The Most Probable Number Method 100g/ml检样中最近似值(MPN)表 以1、0.1、0.01、各用3管。 阳性管数 MPN 个/100 g/ml 1g/ml×3 0.1g/ml×3 0.01g/ml×3 0 0 0 ＜30　　 0 0 1 30 0 0 2 60 0 0 3 90 0 1 0 30 0 1 1 60 0 1 2 90 0 1 3 120 0 2 0 60 0 2 1 90 0 2 2 120 0 2 3 150 0 3 0 90 0 3 1 130 0 3 2 160 0 3 3 190 大 肠 杆 菌 检 验 流 程 均质，接种9支LST发酵管 接种EC发酵管 EMB平板划线 可疑菌落斜面纯化 生化反应：I M V iC 报告结果 培养48小时 培养48小时 培养24小时 培养24小时 96小时 1天 + 2天 + 1天 + 1天 + 4天 = 10天 五、粪大肠菌群的检验 粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 检验方法 检样 产酸产气 查MPN表报告 EMB 分离靛质基试验 阳性反应 方法一： 45 ℃EC肉汤发酵 稀释 44℃乳糖胆盐发酵 方法二： 检样 稀释 36℃乳糖胆盐发酵 产酸产气 产酸产气 EMB 分离 查MPN表报告 1、从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。 2、对产酸但未看到气泡的乳糖发酵，用手轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，应作进一步试验。 3、挑选菌落进行证实试验时，最少要挑2个以上的典型菌落或非典型菌落进行接种。 4、不可用其他胆盐代替指定的胆盐。 六、检验注意事项 七、大肠菌群快速检验 食品大肠菌群快速检验方法： TTC显色法； DC试管法； 纸片法。 （一）食品饮料大肠菌群快速检验纸片 ?????使用方法： 1.样品稀释同国标法 2.接种： 饮料和饮用水采用原液、1:10、 1:100三个稀释度，固体食品采用1:1 、1:10和1:100三个稀释度。用1亳升灭菌吸管吸取1亳升同一稀释度的稀释液均匀涂布到袋中的纸片上，做三个重复。 第一节食品中菌落总数的测定 一、菌落总数 是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后,所得1mL(g)或1cm2面积检样中所含菌落的总数。 二、菌落总数测定的意义 1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。 三、菌落总数测定的方法 ※ 平板倾注法＃ 平板表面涂布法 平板表面点滴法 （一）、样品稀释及做平板 1ml 1ml 1ml 1ml 1:10 1:1000 1:100 1:10000 1ml 1ml 1ml 加入46℃营养琼脂12~15ml 25g/ml样品 生理盐水 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。 （二）培养 普通食品:37 ℃ 48h 倒放平板 清凉饮料、调味品、糕点、酒类： 37 ℃ 24h 水产品: 30℃ 48h （三）计数和报告 到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。 1、菌落的选择 （1）、单个菌做一个菌落计 （2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。 （3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。 2、平板菌落计数的选择 （1）、选取菌落数在30～300之间的平板（SN标准要求为