亮白曲霉乳糖酶基因在毕赤酵母中高效分泌表达及酶学性质研究.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 %’ (! - (# 年 月 #$$ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+,’ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 亮白曲霉乳糖酶基因在毕赤酵母中的高效分泌表达及酶学性质研究 1 1 # 张 伟 范云六 姚 斌 1 # （中国农业科学院 生物技术研究所 饲料研究所 北京 1$$$.1） 摘 要：将克隆的亮白曲霉（ ）乳糖酶基因 插入到毕赤酵母（ ）高效表达载体 !#$%’(() *+,-’-) (+*. H /’*0’+ # +12%’ 中，与分泌信号肽序列 因子融合，通过同源重组将 整合到酵母染色体上。通过 检测和表达 *IJK5 4 (+*. H LML4I)N: ! 产物的酶活性筛选，得到重组转化子，证明乳糖酶获得有效分泌和高效表达。表达的乳糖酶为糖蛋白，表观分子量 为 ，脱糖基后的蛋白分子量下降为 。经过 小罐高密度发酵，重组酵母中酶蛋白表达量为 发 10$OM 11$OM P /;FQ;P 酵液，每毫升发酵液中乳糖酶的活力为0/$$R，高于目前国内外报道的水平。进一步研究了表达产物的酶学性质， 该酶最适 为 ，最适反应温度 ，比活性为 ， 为 ， 为 。与米曲霉 *S T# /$U 6$/ T V # T/RQ;F 3; 1T6;;’Q P 4;89 0 T0 ;’Q;, 的乳糖酶相比，该乳糖酶具热稳定性强、比活性高、 范围宽等特点。 )2KK #$!#0 *S 关键词：乳糖酶，毕赤酵母，高效表达，酶学性质 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） W6./ W ) $$$14/#$5 #$$ $#4$#!64$/ 乳糖 酶 （ 半乳糖苷 酶， 到胞外，但也存在着菌体生长繁殖周期长、表达稳定 4M4 4M4F8’8ABX,Y3 # # F8’8BEY+’8X3， ）可将牛乳和乳制品中 性差、分离纯化困难等局限性。 :K 0 T# T 1T#0 的主要糖成分———乳糖水解为半乳糖和葡萄糖，主 因此，寻求更加有效的表达系统高效分泌表达 要应用于生产营养成分更利于人体消化吸收的低乳 乳糖酶是提高