瑞氏木霉β葡萄糖苷酶在纤维素酶诱导表达过程中作用机制的研究微生物学专业论文.docxVIP

|J舢0删棚JJJJ0删舢舢棚JJJJJ删原创性声明 |J舢0删棚JJJJ0删舢舢棚JJJJJ删 原创性声明 Y2593833 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本 文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：皇盏：塾i盘论文作者签名： 五鱼：塾!塑 日期：日 期： 关于学位论文使用授权的声明 本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件 和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：彳釜孟鸯导师签名：辑日、 期。 山东大学博士学位论文目录 山东大学博士学位论文 目录 摘要 ．．1 关键词 ．5 ABSTRACT 6 KEYWORDS ．．10 缩略词表 ．11 第一章绪论 12 1．1纤维素的结构 12 1．2纤维素的微生物降解 13 1．2．1纤维素降解细菌 ．13 1．2．2纤维素降解古菌 14 1．2．3纤维素降解真菌 15 1．3纤维素降解酶系 ．16 1．3．1纤维素酶的分类 16 1．3．2纤维素酶系 ．17 1．4瑞氏木霉及其纤维素酶诱导表达调控机制 19 1．4．1瑞氏木霉对不同诱导碳源的响应 ．20 1．4．2瑞氏木霉纤维素酶基因转录调控 28 1．4-3瑞氏木霉纤维素酶诱导表达过程中的信号传递 31 1．4．4葡萄糖苷酶在纤维素酶诱导表达过程中的作用 34 1．5论文立题依据以及主要内容 36 第二章瑞氏木霉B．葡萄糖苷酶基因缺失菌株的构建 39 2．1材料与方法 39 2．1．1菌株和质粒 ．39 2．1．2本章实验所用到的引物 40 2．1．3培养基 41 2．1．4主要试剂和仪器 42 2．1．5瑞氏木霉原生质体转化 42 2．1．6瑞氏木霉基因组DNA提取 ．43 山东大学博士学位论文2．1．7 山东大学博士学位论文 2．1．7 Southern Blot方法 44 2．1．8基因敲除质粒构建 45 2．1．9 B．葡萄糖苷酶酶活测定 。46 2．1．10瑞氏木霉全细胞提取液制备 一46 2．2结果与讨论 47 2．2．1 Acella菌株构建 ．47 2．2．2 Acellb菌株的构建 ．．49 2．2．3 Acellahcellb菌株的构建 ．51 2．2．4 AtripG菌株的构建 一52 2．2．5胞内B一葡萄糖苷酶酶活分析 54 2．2．6胞外B一葡萄糖苷酶酶活分析 ．．55 2．3小结 ．56 第三章瑞氏木霉主要p一葡萄糖苷酶在纤维素诱导纤维素酶基因表达过程中 的作用研究 ．57 3．1材料与方法 57 3．1．1菌种与质粒 57 3．1．2本章实验用到的引物 ．58 3．1．3培养基 58 3．1．4主要试剂和仪器 59 3．1．5瑞氏木霉培养条件 59 3．1．6瑞氏木霉生长测定 ．59 3．1．7纤维素外切酶酶活测定 60 3．1．8瑞氏木霉总RNA提取(Trizol法) ．．60 3．1．9 Northern Blot(罗氏DIG Northern Starter Kit) ．60 3．1．10 qRT-PCR