一株拮抗马铃薯晚疫病菌菌株的分离鉴定及抑菌性初步分析植物病理学专业论文.docxVIP

1．6 1．6 ITS在真菌分类中的应用 ．13 1．7本研究的目的意义 14 2材料与方法 15 2．1供试材料 l 5 2．1．1菌株及载体 ．1 5 2．1．2供试真菌及病原菌 ．1 5 2．1．3马铃薯品种 15 2．1．4供试培养基 ．15 2．1．5主要试剂 16 2．1．6主要仪器设备 一1 6 2．2试验方法 ．17 2．2．1 WZJ菌株对马铃薯晚疫病菌菌丝生长的抑制作用 1 7 2．2．2 WZJ菌株抑菌谱的测定 1 7 2．2．3菌株的鉴定 ．17 2．2．3．1形态学鉴定 1 7 2．2．3．2分子生物学鉴定 1 8 2．2．4进化树的构建 一19 2．2．5 WZJ菌株的生物学特性 ：19 2．2．5．1不同培养基对WZJ菌株菌丝生长的影响测定 19 2．2．5．2温度对WZJ菌株菌丝生长的影响测定 20 2．2．5．3起始PH对WZJ菌株菌丝生长的影响测定 ．20 2．2．6抑菌物质存在部位的检测(胞内／胞外) 20 2．2．6．1发酵上清液的制备及处理 20 2．2．6．2胞内／胞外物质的抑菌活性测定 ．20 2．2．7发酵上清液对马铃薯晚疫病菌菌丝生长的影响 ．21 2．2．7．1不同天数的发酵上清液对马铃薯晚疫病菌菌丝生长的抑制作用 一21 2．2．7．2发酵上清液对马铃薯晚疫病菌“IC50”的测定 21 2．2．8抑菌物质的基本属性测定 ．22 2．2．8．1抑菌物质的溶解性 。22 2．2．8．2抑菌物质的热稳定性 22 II 万方数据 2．2．8．3发酵上清液中脂肪类物质活性检测 2．2．8．3发酵上清液中脂肪类物质活性检测 ．．22 2．2．8．4发酵上清液中多糖类物质活性检测 。22 2．2．9 WZJ菌株代谢产物在离体叶片上对马铃薯晚疫病的防效测定 22 2．2．9．1马铃薯晚疫病菌游动孢子悬浮液的制备 。22 2．2．9．2离体叶片试验测试WZJ菌株发酵上清液对马铃薯晚疫病的防治作用 23 2．2．9．3荧光定量检测马铃薯晚疫病菌菌丝生长量 一23 3结果与分析 23 3．1 WZJ菌株对马铃薯晚疫病菌菌丝生长拮抗作用结果 23 3．2 WZJ菌株抑菌谱的测试结果 25 3．3 WZJ菌株鉴定结果 26 3．3．1形态学鉴定结果 ．26 3．3．2分子生物学鉴定结果 ．27 313．3进化树的构建 ．．28 3．4 WZJ菌株的生物学特性 29 3．4．1不同培养基对WZJ菌株菌丝生长的影响结果 29 3．4．2温度对W刁菌株菌丝生长的影响结果 30 3-4．3起始PH对WZJ菌株菌丝生长的影响结果 31 3．5 WZJ菌株活性成分的研究 32 3．5．1发酵上清液及菌丝体形态 ．32 3．5．2胞内／胞外物质的抑菌活性测定 32 3．5．3不同天数的发酵上清液对马铃薯晚疫病菌抑制作用测试 ．33 3．5．4发酵上清液对马铃薯晚疫病菌“IC50”的测定 34 3．6抑菌物质的基本属性测定 35 3．6．1抑菌物质的溶解性 ．35 3．6．2抑菌物质的热稳定性 ．36 3．6．3发酵上清液中脂肪类物质活性检测 ．36 3．6．4发酵上清液中多糖类物质活性检测 ．37 3．7离体叶片试验测试发酵上清液对马铃薯晚疫病的防治作用 37 4讨论 38 4．1 WZJ菌株的分类鉴定 38 III 万方数据 4．2 4．2 WZJ菌株发酵条件的优化 39 4．3 WZJ菌株次生代谢产物对马铃薯晚疫病抑菌作用 39 4．4 WZJ菌株作为生防菌株的应用潜力 40 5结论 41 6参考文献 ．42 7附录 50 8致谢 51 IV 万方数据 山东农业大学硕士学位论文中文摘 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要中又摘要 由致病疫霉Phytophthora infestans(Mont．)de Bary引起的马铃薯晚疫病是生产上 最重要的农业病害之一，每年造成我国约65．130亿元的经济损失。通过筛选和鉴定对 致病疫霉有拮抗作用的菌种资源来防治马铃薯晚疫病，这在生产上具有广阔的应用潜 力。 地丝菌属真菌Geomyces sp．WZJ是本实验室在培养马铃薯晚疫病菌时偶然发现并分 离得到的。通过对峙实验检测其对马铃薯晚疫病菌不同菌株的抑制效率，结果发现该菌 株对本实验室保存的13个马铃薯晚疫病菌菌株具有相似的抑制作用，抑制效率在 64．4％一78．5％之间。检测其抑菌谱发现，该菌株对辣椒疫霉(尸．capsici)、大豆疫霉(P sojae)和烟草黑胫病菌(P nicotianae)等卵菌病原也具有良好的拮抗效果，抑制率分 别达到68．4％、58．5％、58．7％，而对其它真菌病害抑制效率较差，说明该菌株对疫霉 属病原菌具有一定的特异性拮抗作用。 通过形态学和分子生物学方法对其