cd82胞外小环结构域抑制肿瘤细胞迁移及诱导凋亡的机理的研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

目 目 录 一、摘要 。1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 4 二、正文 7 第一部分 7 (一)一flu言(一) 舌 ．1／． (二)材料与方法 8 (三)结果 ．10 (四)讨论 19 (五)结论 20 第二部分 21 (一)前言(一)刖吾 ．21．Zl (二)材料与方法 ．21 (三)结果 ．25 (四)讨论 ．34 (五)结论 ．35 第三部分 36 (一)前言(一)日IJ舌 ．36．j0 (二)材料与方法 ．36 (三)结果 ．42 万方数据 (四)讨论 (四)讨论 ．50 (五)结论 ．5 1 (六)参考文献 ．5 1 三、综述 55 (一)综述 ．55 (二)参考文献 ．60 四、致谢 65 万方数据 大连医科大学硕士学位论文CD82胞外小环结构域抑制肿瘤细胞迁移及诱导凋亡的机理的研究 大连医科大学硕士学位论文 CD82胞外小环结构域抑制肿瘤细胞迁移及诱导凋亡的机理的研究 硕士研究生： 王聪聪 指导教师： 马克里教授 专业名称：生物化学与分子生物学 摘 要 CD82蛋白是抑癌基因KAll编码的细胞膜糖蛋白，属于四跨膜蛋白超家族 (transmembrane 4 superfamily TM4SF)成员之一，其主要生物学功能是参与细胞的 聚集、粘附、迁移以及调控。CD82在正常机体组织广泛表达，在肿瘤组织表达 下降或不表达。大量研究结果表明，CD82可抑制多种组织来源的肿瘤细胞体外 迁移和体内转移，被认为是广谱的肿瘤转移抑制因子。对其作用机制的研究日益 受到重视。 CD82由胞外区、跨膜区和胞内区三部分组成。胞外区形成一个小环(small extracelltflar loop，SEL)和一个大环(1arge extracellular loop，LEL)；跨膜区为四 个疏水的肽段；胞内区包括N．端、C．端和一个细胞内环。对CD82蛋白不同结构 域的作用进行研究，对阐明其抑制肿瘤转移的分子机理具有十分重要的理论意义。 目前，对CD82胞外区大环结构的功能研究较多，对CD82胞外区小环结构功能 的研究很少，其功能尚不明确。为弄清楚CD82胞外小环结构域在CD82抑制肿 瘤转移中的作用，本论文采用化学方法合成CD82．SEL氨基酸序列模拟肽 (CD82．SEL．P)，对其在细胞迁移、生长及凋亡中的作用进行了研究。 1．CD82．SEL．P对贴壁生长、体外迁移运动等的影响。 采用划痕法、Boyden小室培养法，观察了CD82．SEL．P对不同组织来源的肿瘤 细胞贴壁生长、体外迁移运动等的影响。 实验结果：(1)发现CD82．SEL．P可显著抑制各种贴壁生长的肿瘤细胞的迁移运 动，其抑制作用与处理浓度呈正相关。(2)发现CD82．SEL．P可显著抑制细胞的 万方数据 大连医科大学硕士学位论文贴壁，转而聚团悬浮生长，其抑制细胞贴壁能力与处理浓度呈正相关。(3)发现 大连医科大学硕士学位论文 贴壁，转而聚团悬浮生长，其抑制细胞贴壁能力与处理浓度呈正相关。(3)发现 CD82一SEL．P促进悬浮生长的细胞聚团生长。 结论：CD82．SEL．P能抑制体外培养的贴壁细胞迁移运动；抑制贴壁生长细胞 的贴壁，转而聚团悬浮生长；促进悬浮生长的细胞聚团生长。且抑制作用均与处 理浓度呈正相关。说明CD82．SEL可能是CD82与肿瘤转移抑制有关的重要结构 域，并且独立的CD82．SEL就有肿瘤转移抑制的功能。这一结论尚属首次报道。 2．CD82．SEL．P对肿瘤细胞生长、增殖的影响。 采用细胞荧光组化及MTT法检测了CD82．SEL．P对不同肿瘤细胞生长及形态的 影响。 实验结果：(1)CD82．SEL．P可使培养肿瘤细胞收缩、胞浆出现颗粒、空泡， 细胞与培养板剥离脱落。 (2)CD82．SEL．P可以抑制各种贴壁培养肿瘤细胞的生 长、增殖，其抑制作用呈浓度依赖性。(3)CD82．SEL．P促进悬浮生长细胞的生长、 增殖。 结论：CD82．SEL．P对贴壁生长细胞和悬浮生长的细胞作用相反。CD82．SEL．P 抑制体外培养的贴壁细胞的生长增殖，促进悬浮生长细胞的生长增殖。 3．以生物素标记的CD82．SEL．P做探针，采用Western blot等技术分别检测了 CD82．SEL—P可能结合的膜蛋白和膜脂，以确定与CD82．SEL。P结合的靶分子。 实验结果：(1)Western blot结果显示，生物素标记的CD82．SEL．P探针可识别 结合的蛋白有数十条之多且均为膜蛋白。 (2)生物素标记的CD82．SEL．P可结合 到细胞总脂包被的硅胶小球，说明CD82．SEL．P识别结合的靶分子有脂类成份。 结论：CD82．SEL．P识别结合的特异结构是寡糖链，其靶分子不是某个特异的蛋 白或脂类分子，而是多个分子；包括糖蛋白和糖脂。 4．C