二氢丹参酮ⅰ对肿瘤细胞中缺氧诱导因子1α及其信号转导通路的影响化学专业论文.docxVIP

本论文已达到理学硕士学位论文要求延边大学 本论文已达到理学硕士学位论文要求 延边大学 201 6年5月1 8日 万方数据 学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用 过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名：垄聋 日期：冱2么生』卫邂 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可 以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并 授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按 保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．保密 口，在 年解密后适用于本声明；2．不保密 酐 研究生签名：望复堑导师签名：研究生签名： 銎塑导师签名： 万方数据 延边大学硕士学位论文 延边大学硕士学位论文 二氢丹参酮I对肿瘤细胞中缺氧诱导因子．1a极其信号转导通路的影响 摘要 肿瘤细胞在机体内快速生长，压迫血管，导致机体组织内缺氧，缺氧诱导因 子．1(HIF．1)作为缺氧微环境下的转录调控因子，促进肿瘤的发生、发展。因此 HIF．1成为一个重要的抗癌药物的靶标。来源于唇形科植物丹参根茎的菲醌类化 合物二氢丹参酮I，由于在中草药中具有抗肿瘤、抗菌的价值而被广泛研究。然 而二氢丹参酮、I以HIF．1为药物靶标的抗肿瘤活性的分子机制尚不明确。 首先，通过荧光素酶报告基因(Luciferase reporterassay)实验证明二氢丹参 酮I抑制宫颈癌(HeLa)细胞中HIF．1a的转录活性：通过免疫印迹(Western Blot)实验证明二氢丹参酮I以剂量依赖性的方式抑制缺氧条件下HeLa细胞中 HIF．1a的活化，然而对内参Topo．I的蛋白表达没有影响；通过免疫荧光实验再 一次证明二氢丹参酮I抑制缺氧诱导下细胞核内HIF．1a蛋白的积累。其次，通 过免疫印迹实验证明二氢丹参酮I不是通过加速HIF．1a蛋白的降解和抑制HIF． 1a mRNA的表达，而是通过调控磷脂酰肌醇(．3)激酶(P13K)／雷帕霉素靶蛋 白(mTOR)／核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)信 号通路抑制HIF．1a蛋白的合成，使HIF．1a蛋白不能在细胞内表达。在P13K ／mTOR／p70SfiK和ERK信号通路中，二氢丹参酮I剂量性地降低了磷酸化．mTOR、 磷酸化．p70S6K、磷酸化．真核细胞起始因子4E(eIF4E)、磷酸化．elF4E结合蛋 白．1(4E．BPl)、磷酸化．细胞信号外调节激酶．1／2(ERKl／2)蛋白的表达，而对 mTOR、p70S6K、4E．BPl、elF4E、ERKl／2总蛋白的表达没有影响。随后，通 过免疫印迹、逆转录．聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)证 明二氢丹参酮I抑制HIF．1a相关靶基因血管内皮生长因子(V】三GF)、葡萄糖转 运蛋白(GLUT-1)、促红细胞生成素(EPO)的表达；通过MTT细胞增殖实验、 流式细胞周期实验证明二氢丹参酮I使肿瘤细胞停滞在G1期，导致细胞增殖速 率减慢。最后，通过免疫组化实验证明二氢丹参酮I修复肿瘤细胞的坏死，降低 肿瘤组织中HIF．1a、VEGF蛋白表达；裸鼠皮下移植瘤实验表明，二氢丹参酮I 通过降低捣碎的肿瘤组织中HIF．1a蛋白表达，抑制肿瘤细胞的生长。 万方数据 延边大学硕士学位论文 延边大学硕士学位论文 二氢丹参酮I对肿瘤细胞中缺氧诱导因子．1d极其信号转导通路的影响 二氢丹参酮I作为HIF—l抑制剂，通过调控P13K／mTOR／p70S6K和ERK 信号通路抑制HIF．1 a蛋白的合成，有望为二氢丹参酮I抗肿瘤新药开发及其临 床应用提供理论基础。 关键词：二氢丹参酮I；HIF．1a；mTOR；抗癌 万方数据 延边大学硕士学位论文 延边大学硕士学位论文 二氢丹参酮I对肿瘤细胞中缺氧诱导因子．1俚极其信号转导通路的影响 Abstract The hypoxia-inducible factor-1(HIF-1)has been known to be correlated to the adaptation and proliferation of tumor cells and HIF-1 plays im