高中生物选修三 DNA重组技术的基本工具.pptVIP

1.1 DNA重组技术的基本工具 专题一 基因工程 一、基因工程的概念应从以下几个方面理解： 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 二、限制性核酸内切酶 （1）限制酶切割的什么键？ （2）限制酶从哪里来？ （3）什么是黏性末端？限制酶切割DNA后一定会形成黏性末端吗？ 磷酸二酯键 主要是从原核生物中分离纯化的 3.写出EcoRⅠ限制酶的识别序列，画出切割位点和切割后的黏性末端。 3.写出EcoRⅠ限制酶的识别序列，画出切割位点和切割后的黏性末端。 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 SmaⅠ 平末端 　　　平末端 二、限制性核酸内切酶 1.限制性核酸内切酶所识别DNA序列的特点——举例说明回文序列 回文序列： 在切割部位，一条链 正向读的碱基顺序与 另一条链反向读的顺 序完全一致。 2.限制性核酸内切酶的专一性表现特点 能识别特定核苷酸序列； 从特定部位的两个核苷酸之间切开。 判断： 每一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 某特定的核苷酸序列只能被一种限制酶识别 √ × 阅读 总结 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，也有两种酶。 黏性末端 平末端 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 三、DNA连接酶 1.E·coli DNA连接酶或T4DNA连接酶 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 2.T4DNA连接酶 　 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 T4DNA连接酶 2. 不同的限制性核酸内切酶切割产生的黏性末端是否可以连接？举例说明。 如果黏性末端相同，则可以互补连接； 如果黏性末端不同，则不能互补配对，不能连接。 BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— 下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。 3.完成课本P7“思考与探究”1题 2和7能连接形成 4和8能连接形成 3和6能连接形成 1和5能连接形成 P7“思考与探究”2题 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过修饰不能识别切割序列，使限制酶不能将其切开。 1.比较：DNA连接酶与DNA聚合酶的区别 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 1.天然的质粒DNA分子可以直接用做基因工程的载体吗？为什么？ 四、运载体 运载体需要满足的条件： ⑴ 有1~多个限制酶切点 ⑵对受体细胞无害 ⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 ⑷有某些标记基因，便于筛选 一般不能，自然存在的质粒并不完全具备下列条件。 常用的载体：质粒 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别 改造 2. 切割运载体和目的基因是否用同一种限制酶？ 3.被限制酶切割后的质粒一定会与目的基因相连接吗？ 要用同种限制酶，切割产生相同的黏性末端，使目的基因与运载体相连接。 不一定，可能是质粒与目的基因相连接；可能是质粒与质粒之间连接；可能是目的基因之间连接。 Ⅲ 检测与反馈答案 1-6 D D D C B B 7．① ② ③能。因为目的基因两端的黏性末端恰好与质粒缺口处的黏性末端碱基互补。 一、基因工程的概念. 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶---”分子手术刀” 2. DNA连接酶---”分子缝合针” 3 基因的运载工具——运载体：具备条件 本课小结： 分类 作用 来源 作用 特点 结果 作业： 重组DNA分子的模拟制作 (用纸条和胶带等作出模型） * * * *