反应停对胆囊癌细胞的作用及机制研究外科学专业论文.docxVIP

博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 中文摘要 第一章 反应停对胆囊癌细胞GBC-SD体外抗癌作用 目的：探讨反应停对胆囊癌细胞的敏感性及作用和其对细胞周期的 影响以及反应停和5一Fu的联合作用。 方法：体外培养胆囊癌细胞GBC-SD，采用不同浓度的反应停对胆囊癌 细胞进行干预，(1)用MTT法检测各次的抑制率并算出中效浓度，并检测 反应停与5-Fu联合作用对GBC—SD细胞的抑制情况；(2)应用台盼蓝拒染 法检测细胞生长曲线；(3)应用光学显微镜和电子显微镜观察反应停作用 后细胞形态的变化及超微结构变化；(4)用流式细胞仪检测反应停对胆囊 癌细胞各周期的影响，并测出细胞凋亡情况。 结果：(1)不同浓度的反应停对胆囊癌细胞的抑制率不同，细胞的抑 制率与反应停浓度呈剂量依赖性，半数抑制浓度为19．44 l-Lmol／L。反应停 与5-Fu联合用药对GBC-SD细胞的两药相互作用系数均小于1，20 ltmol／L 的反应停和20 pg／ml的5．Fu的两药相互作用系数最小，为0．71。(2)台 盼蓝拒染法检测：10 pmol／L的反应停干预组细胞出现生长速度稍有减慢， 但作用不明显； 20 umol／L、40 pmol／L的反应停干预组出现活细胞数量 下降，细胞明显抑制(PO．01)。20 pmol／L的反应停能够抑制细胞的生长， 第二天表现抑制作用最明显；40 lamol／L的反应停能够抑制并直接杀死细 胞，表现为第二天后细胞数量没有增加反而减少。(3)反应停作用48小 时后用显微镜观察。光学显微镜下可见细胞数目减少；胞浆透亮度下降， 细胞体积变小，变圆形。电子显微镜下可见细胞核染色质凝聚深染，内质 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 网、线粒体肿胀，内部结构混乱。并可见核固宿、核碎裂，及凋亡小体的 形成等细胞凋亡的表现。(4)流式细胞仪检测发现：①不同浓度反应停作 用GBC-SD后G。／G。期所占的比例是不同的，随着反应停浓度的增加，G。／G。 期所占的比例逐步上升，而细胞增殖指数(PI)逐步下降。@Annexin V-FITC／PI双标记法检测，随药物浓度的增加，细胞的凋亡率逐步增加， 且差异明显(PO．05)；在相同的药物浓度下，24小时的细胞凋亡率明显 低于48小时的细胞凋亡率(P0．05)。 结论：(1)反应停能够抑制胆囊癌细胞的生长，且抑制作用与剂量和 时间有关。(2)反应停可以诱导GBC—SD细胞的凋亡，使细胞阻滞于G1 期，其作用也与剂量和时间有关。 (3)反应停可以和5-Fu联合用药，具 有协同效果。 关键词：反应停，胆囊癌细胞，增殖，凋亡 第二章反应停对胆囊癌细胞的作用机制研究 目的：初步探讨反应停对胆囊癌细胞的作用机制。 方法：应用RT-PCR技术检测经反应停作用后胆囊癌细胞中survivin、 VEGF、MMP-9的表达。 结果：经反应停作用48小时后survivin／B—actin的比值对照组为 1．864-0．50、10 l-Imol／L组为1．39±O．43、20 l-lmol／L组为0．36±O．24、 40 l_lmol／L组为0．15±O．07，随着反应停作用浓度的增加，survivin mRNA 的表达下降；VEGF／B-actin的比值对照组为2．47±O．76、10 l_Imol／L组 为1．86±0．61、20 l_lmol／L组为0．89+0．41、40 lJmol／L组为0．25±0．13， 随着反应停作用浓度的增加，VEGF mRNA的表达下降；MMP一9／B-actin II 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 的比值对照组为2．16±O．76、10 wmol／L组为1．42±O．43、20 wmol／L组 为0．79±0．32、40 umol／L组为0．31±O．23，随着反应停作用浓度的增加， MMP-