sox2对tregs的招募及对肿瘤微环境的影响生理学专业论文.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 目的：在肿瘤发生发展的过程中，存在很多因素阻碍免疫系统发挥对肿瘤 细胞的杀伤作用。除了肿瘤细胞本身的免疫逃逸，肿瘤微环境中的免疫抑制细 胞——调节性T细胞(Regulatory T cells，Tregs)也起到了重要作用。目前， 肿瘤细胞对Tregs招募作用的机理是当前肿瘤免疫的研究热点之一。转录因子 SOX2是维持胚胎干细胞及肿瘤干细胞多样性的重要基因，并且已经证实， SOX2在多种肿瘤的发生及转移进程中起了重要作用。肿瘤干细胞样细胞如何 招募Tregs并影响肿瘤微环境的机制尚未明确。本课题将探讨Sox2对Tregs的 招募作用及其分子机理。 方法：首先，本实验运用免疫组化的方法分别检测了225例乳腺癌组织、 45例癌旁组织、17例正常乳腺上皮组织、9例转移淋巴结组织及9例无转移淋 巴结组织中SOX2和Foxp3的表达情况。其次，建立了Sox2基因沉默的稳定细 胞系，通过实时定量PCR检测了细胞系中与Tregs招募相关的细胞因子， CCLl、CCL22及CCL28；同时在乳腺癌移植模型中检测了Sox2对Tregs的招 募作用及其对相关细胞因子表达的影响。再次，运用Western blot和Real．time RT．PCR分析SOX2对Tregs招募相关的细胞因子的调控作用及其信号通路。最 后，使用FACS、免疫荧光及Real．time RT．PCR分析肿瘤组织和脾脏中T细胞 比例的变化，同时检测Thl、Th2相关细胞因子的表达变化，证明Sox2对肿瘤 微环境的重塑。 结果：我们发现在肿瘤组织中有44．1％的标本表达Foxp3，且其表达水平 与SOX2的表达水平正相关；体内和体外实验均表明，Sox2基因沉默后，其对 Tregs的招募作用会明显下降，同时，与Tregs招募相关的细胞因子CCLl、 CCL22及CCL28的表达水平随着肿瘤微环境中Foxp3、CD31和Lyve．1表达量 的降低及CD8+T细胞的增加而降低；同时，Yhl相关的标志分子表达量增加， Yh2相关的标志分子表达量降低。另外，通过瘤内注射CCL22和CCL28细胞 因子，发现小鼠肿瘤中Tregs的比例增加，并恢复了由沉默Sox2对肿瘤微环境 造成的影响。这些结果说明，Tregs在Sox2对肿瘤微环境调控的过程中发挥了 重要作用。最后，我们检测了与CCLl、CCL22及CCL28分泌相关的NF—kB信 号通路，发现Sox2可以对其进行调控，在沉默Sox2的细胞系中，NF．kB信号 I 中文摘要通路的活性降低。这些结果支持了我们的假设，即Sox2对Tregs具有招募作 中文摘要 通路的活性降低。这些结果支持了我们的假设，即Sox2对Tregs具有招募作 用且对肿瘤微环境造成影响。 结论：我们的实验证明Sox2可以招募免疫抑制性细胞Tregs，从而完成对 肿瘤微环境的重塑，因此靶向Sox2重塑肿瘤微环境可能为乳腺癌治疗提供新 的理论依据。 关键词：Sox2乳腺癌Tregs肿瘤微环境 ———————————————————————————一 ———————————————————————————一垒!!坚堕 一 Abstract factors play Objective：During the initiation and progression of tumor，several import孤t roles in suppressing antitumor immunity．In the tumor microenviroment (TME)．besides the capability of tumor cells in escaping from immune survlllencce， the regulatory T cells(Tregs)function as a key component ot 1n turnor immunosuppression．At present，the mechanism underl皿ng recruitment of Tregs to in stem tumor cells is a hot topic in tumor immunity．Sox2，a transcriptional factor cells．plays an important role in maintaining the stemness and pluripotency property of embryonic stern cells and cancer stem cells(CSCs)．It was demonstrated that Sox2 contributes to the