bcl6b基因在抑制肝细胞肝癌和肝纤维化的发生发展的机制研究外科学普外专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 寒窗苦读数十载，梦转千回今始开。廿年前小学课堂上许下的愿望，十年前大 学校园里立下的誓言，Doctor的梦想即将实现：要当一名知识渊博的博士，更要 当一名救死扶伤的医生!十年漫漫医学路，从温医大的奋发求实，到浙医大的求 是创新，不变的是对知识的渴望和对真理的执着。回首这十年，收获无数，更感 恩万千。 首先，感谢郑树森院士及带领下的浙大一院团队。国际前沿的视野，先进精湛 的学术造诣，严谨求实的治学风格，郑院士的人格魅力深深打动着我，激励我奋 发前行。世界顶尖的学术和医疗团队，国际前沿的科学研究平台，让我能够大展 拳脚，受益良多。 由衷感谢我的导师王伟林教授对我的谆谆教诲和悉心关怀。在我的学习过程 中，从论文选题、实验设计及实施，到论文的撰写和修改，每一个环节都凝聚着 恩师的汗水和心血。王伟林教授还给我提供了很好的学术环境，让我能在国际的 平台上交流和学习，开阔眼界。 感谢卫生部多器官联合移植实验室的周琳主任、谢海洋老师、宋朋红老师、王 雁老师、尉建锋老师等对我实验方法的指导和论文撰写方面的帮助，你们的鼓励 和关怀陪伴着我一起进步。 感谢所有的师兄弟，感谢孙强、周东楷、吴泽辉、谢青松、周小虎、张鹿飞、 杨琪帆、陈凌慧、孔阳、张林世、严英才、吴攀神莎等，感谢你们带来的欢声笑 语与关怀帮助。 在临近毕业之际，特别感谢我的父母，感谢你们一路上对我学业上的支持和鼓 励。感谢我的姐姐，在我求学时对父母的照顾。衷心祝愿我的家人平安喜乐! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 BCL6B基因在抑制肝细胞肝癌和肝纤维化 的发生发展的机制研究 浙江大学医学院 外科学(普外) 博士研究生 黄鹏飞 导 师 王伟林教授 中文摘要 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前占我国恶性肿瘤死亡原因的第二位。 肝脏炎症和肝纤维化是造成肝癌的重要因素，同时也对患者的生活质量造成了严 重影响。肝癌，尤其是伴有肝纤维化的肝细胞肝癌，除了彻底的手术切除，目前 尚缺乏其他有效的治疗方法。通过基因技术手段进行肿瘤分子标志物的筛选和基 因治疗，是目前治疗肝癌的研究方向和研究热点。B细胞慢性淋巴细胞白血病／淋 巴瘤6成员B(B cell CLL／lymphoma 6 member B BCL6B)基因是一个新颖的抑癌基 因，最近被发现在胃癌中低表达，然而在别的肿瘤的表达尚不清楚。研究表明， 肿瘤 BCL6B基因表达量的降低与启动子的高甲基化相关，而且伴有患者术后生 存时间的减少，提示BCL6B可能与肿瘤的发展密切相关。 第一部分BCL6B基因在抑制肝细胞肝癌的发生发展及其机制研究 目的： 探*BCL6B在肝细胞肝癌中的表达量改变，并验证其在体内外实验中的抑癌作 用及机制。 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 方法： 运用定量PCR、免疫印迹(WB)和免疫组织化学(IHC)的方法分析肝细胞 肝癌与癌旁正常肝组织中BCL6B的表达水平。本研究采用肝癌细胞株HepG2 SMMC一7721细胞株，运用慢病毒载体外源性加入重组的BCL6B，建立过表达 BCL6B的细胞模型。应用CCK．8和克隆形成试验检测BcL6B对细胞增殖的影响， 流式细胞术分析细胞的凋亡和周期阻滞情况，Transwell试验检测细胞迁移和侵袭 能力改变。通过裸鼠成瘤试验在体内环境验证BcL6B的抑癌作用。通过表达谱芯 片探讨BCL6B抑制肝癌发生的可能机制。 结果： 相比正常肝细胞，7种肝癌细胞株中BCL6B的表达量出现了不同程度的降低。 选择肝癌细胞株HepG2-弓SMMC一7721过表达BCL6B，发现细胞增殖能力与细胞活 性下降、细胞凋亡增多、细胞迁移和侵袭能力下降，细胞周期阻滞于G0／G1期。体 内试验发现BCL6B使裸鼠皮下成瘤能力明显减弱。表达谱芯片显示BCL6B可能通 过多种信号通路途径影响肝癌的发生发展。 定量PCR结果显示，与癌旁正常肝组织相比，肝癌组织BCL6B的mRNA的水 平显著降低(p0．01)，在蛋白水平通过WB和IHC方法同样得到了验证。联系临床 病理资料分析，发现BCL6B的表达量与肝硬化情况呈正相关(p0．05)，与门静脉 癌栓(PVTT)呈负相关①0．05)。生存曲线表明低表达BCL6B的肝癌患者预后较 差(p0．05)，多因素回归分析显示BCL6B是肝癌预后的独立预测因子。 结论： BCL6B在肝癌组织中低表达，与肝硬化、PVTT及患者生存率密切相关。发现 BCL6B可能通过多途径影响肿瘤细胞的增殖、凋亡和转移能力。 ⅡI 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 【关键字1 BCL6B；肝癌；NN；凋亡 第二部分BCL6B抑制肝纤维化发生