实时荧光定量pcr检测巴尔通体方法的研究生物工程专业论文.docxVIP

分类号：Q81 分类号：Q81 单位代码：10422 密级： 学号：201211718 ⑧∥篓办呈 硕士学位论文 (专业学位) 论文题目：实时荧光定量PCR检测巴尔通体方法的研究 Develonment of real--time fluorescence quantitative PCR for rapid detection of Bartonella 201 5年5月9日 万方数据 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本 文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：叁：l亟蒸H 期：丝笸!堇．9 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允 许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部 或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他 复制手段保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 一一：嶂翩虢脚吼幽 万方数据 山东大学硕士学位论文目录 山东大学硕士学位论文 目录 中文摘要 I ABSTRACT III 缩略词表 ．1V 1．1宗i盔 ．1 1．1巴尔通体流行概况 ．1 1．2巴尔通体实验室诊断 ．2 1．2．1分离培养 ．．2 1．2．2血清学检测 ．．3 1．2．3核酸诊断 ．．3 1．3巴尔通体感染疾病的治疗 1 1 1．4防控措施 1 l 1．5本研究的目的和意义 12 参考文献 ．．1 4 2．应用高分辨率熔解曲线技术检测巴尔通体 1 8 2．1前言 20 2．2材料和方法 21 2．2．1菌株和生物样本DNA ．2 1 2．2．2主要仪器设备与试剂 21 2．2．3巴尔通体菌株的培养 22 2．2．4模板DNA提取 ．22 2．2．5靶基因引物筛选与合成 23 2．2．6常规PCR扩增 一23 2．2．7目的DNA的回收 ．．23 2．2．8克隆反应体系的建立 24 2．2．9重组质粒的构建 24 2．2．10质粒DNA的提取 25 2．2．1 l反应体系及反应参数 ．．25 2．2．12反应条件优化 一26 2．2．1 3特异性分析 ．．26 2．2．14敏感性分析 ．．26 2．2．1 5重复性分析 ．．27 2．3结果 ， ．27 2．3．1常规PCR扩增结果 ．．27 2．3．2阳性克隆的PCR鉴定结果 一27 2．3．3 Bh ssrA基因的测序结果 28 2．3．4质粒拷贝数浓度换算 28 2．3．5应条件的优化 28 2．3．6特异性检测 30 2．3．7敏感性检测 ．3 1 万方数据 山东大学硕士学位论文2．3．8重复性分析 山东大学硕士学位论文 2．3．8重复性分析 33 2．4讨{仑 ．．33 参考文献 ．．35 3．应用双重高分辨率熔解曲线技术检测心内膜炎相关巴尔通体 36 3．1前言 38 3．2材料和方法 40 3．2．1菌株和生物样本DNA ．．40 3．2．2主要仪器设备与试剂 40 3．2．3靶基因筛选、引物的设计与合成 40 3．2．4标准品的制备 4 l 3．2．5质粒拷贝数浓度换算 4 I 3．2．6反应体系及反应参数 4 l 3．2．7反应条件优化 4l 3．2．8双重HRM特异性分析 ．4 l 3．2．9敏感性分析 42 3．2．1 0双重HRM重复性分析 42 3_3结果 一42 3．3．1反应条件的优化 42 3．3．2特异性检测 46 3．3．3敏感性检测 47 3．3．4重复性分析 52 3．4讨{仑 ．．52 参考文献 ．．54 4．双重实时荧光定量PCR TAQMAN探针法检测心内膜炎相关巴尔通体方法的建立 ．57 4．1前言 59 4．2材料和方法 59 4．2．1菌株和生物样本DNA 。59 4．2．2主要仪器设备与试剂 59 4．2．3靶基因筛选、引物与TaqMan探钊‘的设计与合成 ．59 4．2．4标准品的制备 60 4．2．5质粒拷贝数浓度换算 60 4．2．6反应体系及反应参数 60 4．2．7反应条件优化 6l 4．2．8特异性分析 6l 4．2．9敏感性分析 ．6l 4．2．10重复性分析 6l 4-3结果 ．．62 4．3．1反应条件的优化 62 4-3．2特异性检测 64 4．3．3单重实时荧光定量PCR敏感性分析 65 4．3．4双重实时荧光定量PCR敏感性分析 67 4．3．5双重实时荧光定量PCR探针法重复性分析