利用未衍生化氨基酸的LCMS分析进行生物反应器细胞培养监测-Agilent.PDFVIP

应用简报 利用未衍生化氨基酸的 LC/MS 分析 进行生物反应器细胞培养监测 作者 摘要 Jordy Hsiao、Te-Wei Chu、 Andrew Kennedy、 本应用简报介绍了发酵培养基中氨基酸 LC/MS 分析的解决方案。氨基酸的极性使其 Adam Bivens 和 难以进行反相液相色谱分析，因此通常使用衍生化来改善其保留能力。然而，亲水 Anne Blackwell 相互作用色谱 (HILIC) 无需衍生化也能保留并分离复杂的氨基酸混合物，同时还具有 与传统反相液相色谱类似的工作流程。HILIC 与质谱的组合提供了一种极其简单而功 能强大的未衍生化氨基酸分析解决方案。 前言 仪器 • Agilent 1290 Infinity II 二元泵 (G7120A) 监测生物反应器和发酵培养基中发现的各种极性化合物，是亲 • Agilent 1290 Infinity II 样品瓶进样器 (G7129B) 水相互作用色谱 (HILIC) 的一种挑战性实际应用。使用高 pH 条件与负离子模式 LC/MS 检测，可以在一次分析中实现对氨 • Agilent 1290 Infinity II 高容量柱温箱 (G7116B) 基酸、原料与废弃物的监测。Agilent AdvanceBio MS Spent • Agilent 1290 Infinity 液相色谱系列超低扩散工具包 Media 的键合相在高 pH 流动相下具有出色的稳定性，非常适 (5067-5189) 合该体系的分离。 • Agilent 6545 四极杆飞行时间 (Q-TOF) 质谱仪 尽管基质的分析充满挑战性，进样间的重现性仍十分优异。中 • 安捷伦喷射流电喷雾离子源 空纤维反应器和转瓶反应器的检测结果揭示了培养细胞的葡萄 糖和氨基酸消耗以及乳酸分泌。 软件 Agilent MassHunter 工作站软件 B.08.00 实验部分 样品前处理 试剂与化学品 将细胞培养样品用 50% 乙腈稀释 4 倍，并以 10000 × g 的速度 所有试剂均为 HPLC 级或更高等级。超 LC/MS 级乙腈购自 J.T. 离心 10 分钟。收集上清液并进样，无需进一步样品前处理。 Baker (Center Valley, PA, USA)。水的净化处理由 EMD Millipore 流动相 Milli-Q Integral 系统 (Darmstadt, Germany) 完成。试剂级甲 用水配制 100 mM 乙酸铵储备液，并用氢氧化铵将 pH 调节至 9。 酸（FA，部件号 G2453-85060）来自安捷伦科技公司。甲酸 将水与储备液按 9:1 稀释制得流动相 A。将乙腈与储备液按 9:1 铵、乙酸铵、