第18章 色谱析仪器.ppt

一、色谱仪在医学检验中的应用 气相色谱仪常用于人体微量元素的快速分析，血与尿等体液中的脂肪酸、氨基酸、甘油三酸酯、甾族化合物、糖类、蛋白质、维生素、巴比妥酸等化合物的分析，分析鉴定药物的组成和含量、检测人体的代谢产物，通过气相色谱仪和质谱仪的联用技术，在“兴奋剂”检测中分析100余种违禁药品等。 第五节 色谱仪的应用与常见故障 高效液相色谱仪可以分析人体体液内正常与异常代谢物质。比如通过液相色串联谱质谱技术用于氨基酸代谢障碍的检测，进行新生儿疾病的筛选；分析药物的组成和含量，在药物生产中进行中间控制；分析药物在体内的残留量，测定药物在各器官中的代谢产物，进行治疗药物效果的监测（治疗药物检测）；定性测定细胞核中的核苷及核苷酸，分析核酸以及分析氨基酸、酶、糖；激素水平的测定，微生物的鉴定等。 第五节 色谱仪的应用与常见故障 二、色谱仪使用注意事项（一）气相色谱仪1.进样 手不能接触注射器针头和有样品的部位，进样速度要稳、快、速度要均衡，不要有气泡，针尖到气化室中部才开始进样，进样完毕应及时用溶剂清洗注射器； 第五节 色谱仪的应用与常见故障 2.色谱柱安装拆卸 须在常温下进行。安装填充柱卡套密封不宜拧得太紧，每次安装都要换新的密封垫片。注意观察色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定； 3.氢气和空气的比例应为1:10，氢气比例过大，FID检测器的灵敏度会急剧下降； 4.密封垫 气化室温度超过300℃时，应使用耐高温密封垫，注意将带膜的面朝下。 第五节 色谱仪的应用与常见故障 （二）高效液相色谱仪 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前用0.45μm或更细的膜过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质，然后用超声波脱气，恢复到室温后使用； 2.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用纯净水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子； 第五节 色谱仪的应用与常见故障 3.长时间不用仪器，应将柱子取下用堵头封好用有机相(如甲醇等)保存，不能用纯水保存。 4.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器； 5.堵塞导致压力太大时，按照预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。 6.使用过程中要尽量避免产生气泡，以免压力不稳，重复性差； 第五节 色谱仪的应用与常见故障 7.进液管内不进液体时，要使用注射器吸液，输液前要进行流动相的清洗； 8.注意柱子的PH值范围，不得注射强酸、强碱的样品，特别是碱性样品； 9.更换流动相时应先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中；更换无互溶性的流动相时需用异丙醇过渡。 第五节 色谱仪的应用与常见故障 检测器与分光光度计的主要差异有：①样品检测池体积只有5μl～8μl，不致于影响峰形，并做成流动式。②检测灵敏度达0.05～0.01O.D.的满度值（光度计为1.0～0.5O.D.）。为提高灵敏度，样品池做得细长。③对分光后光的单色性、波长精度要求不高，光谱宽度可在10nm，波长精度可以低至±2nm。 第三节 高效液相色谱仪 紫外及可见光检测器是目前高效液相色谱仪中最常用的检测器。它具有灵敏度和检测精度高、线性范围宽、受流量和温度波动的影响小、适用于梯度洗脱及不破坏样品等特点，是一种选择性检测器，只能用于在工作波长范围内有吸收的样品。 第三节 高效液相色谱仪 2.二极管阵列检测器  二极管阵列检测器先让所有波长的光都通过流动池，然后通过后分光技术，使所有波长的光在接受器上被检出。具有以下优点：可得任意波长的色谱图；可得任意时间的光谱图，相当于与紫外联用；色谱峰纯度鉴定、光谱图检索等功能，可提供组分的定性信息。 第三节 高效液相色谱仪 二极管阵列检测器及其谱图 第三节 高效液相色谱仪 3.示差折光检测器（RID） 主要由光源系统、光路系统、接收、放大、记录系统构成。由于各种物质具有不同的折射率，一种混合物的折射率又是各组分折射率的平均值，而溶剂和样品各组分折射率存在一定差异，所以通过检测折射率的变化，就可以达到分析样品各组分的目的。 第三节 高效液相色谱仪 接照作用原理可将示差折光检测器分为反射式和偏转式两种。（1）反射式示差折光检测器：  根据菲涅尔反射原理，相分界面上反射光的强度取决于入射角和相分界面上两种介质的折射率，折射光的强度同样也受入射角和相分界面上两种介质的折射率的影响。 第三节 高效液相色谱仪 1 洗脱液、样品 棱镜 L2 D 接收系统 底板 样品槽 参比槽 L M2 投影系统 F M1 S 出口 (a)光路图 洗脱液或样品 不锈