基于18SrRNA基因测序基础上锥虫分子分类学.pdfVIP

1140 　中 国 兽 医 学 报 　2009 年 9 月 　第 29 卷 　第 9 期 　Chi n J Vet S ci 　Sep . 2009 　Vol . 29 　No . 9 　 基于 18S r RNA 基因测序基础上的锥虫分子分类学 ( 中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验 　　刘光远 , 田占成 ,龚真莉 ,谢俊仁 ,李知新 　 室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室 ,甘肃 兰州 730046) 摘要 :利用 18S r RN A 基因序列分析方法 ,对我国湖北 、广西 、新疆和浙江 4 省的伊氏锥虫及 1 株布氏锥虫进行分子 分类学研究 。用分离的锥虫感染实验动物 , 自感染小鼠的红细胞或全血中提取基因组 DN A ,根据 GenBank 中已发 表的锥虫 18 S r RN A 序列设计 1 对锥虫通用引物 ,通过 PCR 扩增 目的基因片段 ,将扩增产物连接到 p GEMT 载体 中 ,经酶切 、PCR 确定 ,进行序列测定 。结果显示 ,7 个锥虫分离株的 18S r RN A 基因大小为 2 188 bp 。利用DN A S t ar 对试验所获得的这 7 株锥虫和 GenBank 中部分锥虫的 18S r RN A 基因进行比较分析 ,建立 2 个进化系统发生 树 。核苷酸同源性比较及系统发生树显示 : 自我国上述 4 省分离的伊氏锥虫来源于同一株系 ,布氏锥虫和广西分 离的伊氏锥虫株的 18 S r RN A 核苷酸与其他锥虫分离株仅有较小差异 ,与国外的 6 株锥虫的同源性为 99 %～ 100 % ,与另外 7 株的同源性为 62 % 。 关键词 :锥虫 ; 18 S r RN A 基因;分子分类学 中图分类号 :S852 . 72 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2009) Phylogenetic relation of Tr y p a n os ome based on 18S r RNA gene sequencing ( L IU Guangyuan , T IAN Zhancheng , GON G Zhenli ,XIE J unren ,L I Zhixin 　 Key L aboratory of 　　 Vete ri n a ry P a ras i tol og y of Gans u P rov i nce , S t ate Key L aboratory of Veteri na ry E t iolog ical B i ) ol og y , L anz hou Vete ri na ry R es ea rch I ns t i t ute , CA A S , L anz hou 730046 , Ch i n a 　　Abstract : The p hylo genetic relation of T ry p anos om a sp in Hubei , Guangxi , Xinj iang , Zhej iang p rovinces and a st rain of T ry p anos om a bruce were analyzed by u sing 18 S r RN A sequence . The genome DN A wa s ext ract ed f rom t he red bloo d cell s or blood of t he infect ed mou se which inclu