肿瘤细胞与分化、凋亡(一).ppt

肿瘤细胞与分化、凋亡(一) 源于一位权威专家的课件，和大家一起分享 一、肿瘤细胞诱导分化的有关概念 二、分化诱导剂 三、诱导肿瘤分化的研究 定量RT-PCR检测BGC823细胞 Chk1 mRNA表达的改变 定量RT-PCR检测MGC803细胞Chk2 mRNA表达的改变 定量RT-PCR检测BGC823细胞Chk2 mRNA表达的改变 流式细胞术检测结果显示经SB和100mg/kg、200 mg/kg DADS作用后，MGC803细胞移植瘤细胞G2/M期百分率分别比NS对照组增加1.92、2.22和3.37倍 (P＜0.05)，表明DADS呈浓度依赖性对移植瘤细胞有G2/M期阻滞 。 不同浓度DADS处理后移植瘤细胞周期的变化 NS组 SB组 DADS 50mg·kg-1组 DADS 100mg·kg-1组 DADS 200mg·kg-1组 研究表明，cyclin有7种，它们的表达随细胞周期时相的转换而发生改变，不同cyclin须与相应的CDK结合才能促使细胞周期的完成。细胞增殖分裂过程中，cyclins有如下变化：细胞由G0期进入G1期时，cyclinD1-3合成均增加；G1/S期时，cyclinDs及cyclinE降解，cyclinA合成增加；S期进入G2期时，cyclinB合成逐渐增加积累；G2/M期转换时，cyclinA、B降解，cyclinDs、E合成增加。cyclinD1在细胞增殖过程中意义最大，是G1期细胞增殖信号的关键蛋白。许多作者将它视为一种癌基因，其过度表达可导致细胞增殖失控，最终形成肿瘤。 CDKs由CDK1-7 组成，其在细胞周期的特定时间与相应的cyclin结合后，并经磷酸化或去磷酸化后方具有生物活性，促使与细胞周期有关蛋白的基因表达，从而对DNA合成及有丝分裂进行调控。 G1/S期有不同的cyclin/CDK复合体，cyclinD/ CDK4和cyclinE/CDK2激酶活性是细胞周期G1/S期转换所必须的，与cyclinA、E结合的CDK2激酶活性在G1/S期转换时升高，而在M期则降低。 CyclinB/cdc2复合体的活性是细胞进入M期所必的，而G1/S期转换，关系到细胞周期的启动，G2/M期转换则是细胞进行有丝分裂增殖的前提。 CDIs是CDKs的负调控因子，可使CDKs失活；cyclins是CDKs的正调控因子，使CDKs活化，二者对CDK活性的影响控制细胞周期各时相的转换。CDIs可分为两类，一类是P16家族，包括P16、P18、P15、P19，特异地抑制CDK4和CDK6；另一类是P21家族，它包括P21、P27、P57，对CDK具有广谱的抑制作用。 Lee 用flavopiridol处理NSCLC细胞株NCI-H358时，发现flavopiridol可使该细胞生长停止和诱导分化，且分化的启动与cdk2失活相一致，western blot分析处理后细胞的有cyclinE和D1的缺失，表明CDKs调控亚单位缺失是CDK2激酶失活的一个原因，同样CDK1、2、5的抑制剂roscovitine也可以诱导NCI-H358细胞分化，因此诱导分化剂可能通过阻抑CDK2的活性诱导细胞分化。 我们应用Western blot分析发现，在G2/M期阻滞同时有Cdc25C蛋白表达下降，但CDK1蛋白表达不受 DADS 作用的影响。表明 DADS对MGC803细胞的抑制增殖作用与G2/M期阻滞有关，其分子机理可能与降低Cdc25C蛋白水平有关。p38通路调节Cdc25C磷酸酶的表达在DADS诱导MGC803细胞G2/M期阻滞中起着重要作用。 DADS对人胃癌MGC803和BGC823细胞G2/M期检查点 激酶通路的影响 RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变 Western blot检测各蛋白的改变 免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合 M 1 2 3 4 5 6 600bp 300bp Chk1 β-actin RT-PCR 检测MGC803、BGC823细胞 Chk1mRNA表达水平 M：Marker；1：MGC803细胞对照组； 2-3：DADS 处理MGC803细胞1d、2d； 4: BGC823细胞对照组；5-6：DADS 处理BGC823细胞1d、2d M 1 2 3