肠道病毒71型结构蛋白vp1及其肽段的生物学活性研究卫生检验学专业论文.docxVIP

CATAI．OGUEAbstract CATAI．OGUE Abstract in Chinese ．1 Abstract in English ．zI Abbreviation ． ． ． ． ． ．．．． ． ．．． ．．．8 Introduction ． ． ． ． ．． ． ．1 0 Materials and Methods ．． ． ．． ．． ．． ． ． ． ． ． ． ．1 9 1．Materials 1 9 2．Methods ． j ． ． ． ． ． 24 Results ． ．． ． ． ． ． ． ．．． ． ． ．．．． 36 1．Design ofthe peptides ． ．．36 2．Construction of the expression plasmids containing complete and truncated VPl gene fragments ．36 3．The expression of the complete and truncated VP 1 fusion proteins ． ． ． ． 37 4．Identification of biological activity ．． ． ．40 Discussion ．．50 1．The expression ofthe VPl and truncated VPI proteins ． ． 51 2．The detection ofthe reactivity ofthe fusion protein and EV71 polyclonal antibody by ELISA ． ．． ．．5 1 3．The safety ofthe VPl and truncated VPl proteins ．52 4．The detection of reactivity of the polyclonal antibody of the fusion protein and EV71 virus protein by ELISA ． ． ． ．． ．．52 Conclusion ．． ．54 Innovations ．．55 Appendix j ．．56 Reference ． ． ．．． ． ． ．60 Acknowledgments． ． ． 70 Publications ．． ．．． ．．． ． ．． ．．． ．．71 Table of review of dissertation and debate ． ． ． 73 万方数据 山东大学硕士学位论文肠道病毒71型结构蛋白VPl及其肽段的生物学活性研究 山东大学硕士学位论文 肠道病毒71型结构蛋白VPl及其肽段的生物学活性研究 专业：卫生检验学 硕士生：马英伟 导师： 王志玉教授 温红玲副教授 中文摘要 肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)属于小RNA病毒科(Picornaviridae)， 肠道病毒属(Enterovirus)，常引起合并中枢神经系统病变及肺水肿等严重并发 症的手足口病(Hand-foot．and．mouth disease，HFMD)，病变多见于5岁以下婴幼 儿；目前尚无有效的抗病毒药物。EV71的疫苗研究颇有成效：2015年12月3 日，全球首个EV71灭活疫苗获中国国家食品药品监督管理总局批准上市。临床 试验表明，EV71灭活疫苗的安全性及有效性良好，疫苗保护率可达到80％以上。 但灭活疫苗仍存在一些问题，例如免疫效果偏低，免疫反应持续时间较短，需多 次接种才能完成免疫全程等，亟需进行新型疫苗的研发。多肽疫苗是将具有免疫 原性的蛋白片段配以适当的佐剂和载体而合成，与灭活疫苗及减毒活疫苗相比， 多肽疫苗能实现针对病毒的全面保护，且不存在灭活不全及毒力回升等安全性问 题，是发展前景较好的疫苗之一。EV71基因全长编码4个结构蛋白，即VPl、 VP2、VP3和VP4，主要的抗原决定簇位于结构蛋白VPl，本研究运用原核表达 结构蛋白VPl及其肽段，研究其生物学活性，为EV71基于肽段的亚单位疫苗 提供基础性研究。 目的 1．构建EV71结构蛋白VPI及其肽段的原核表达载体。 2．表达并纯化EV71结构蛋白VPl及其肽段。 3．研究重组蛋白的生物学活性。 方法 1．通过序列比对和分析预测VPl保守序列，筛选目的片段。 2．设计引物，以EV71 SDLYl07基因组为模板扩增结构蛋白VPl及其 肽段VPl79~432、VPl436～864、WPl436～735、VPl565～864的基因片段。 3．将目的基因片段与原核表达载体pET-49b(+)双酶切