仿刺参apostichopusjaponicus微卫星标记的开发与应用海洋生态学专业论文.docxVIP

IIll IIll I T Il l l U l I Wll FI III ＼1 928434 仿刺参(Apostichopusjaponicus)微卫星标记 的开发及应用 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (注!翅遗查基丝重噩挂型童明鳆：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：辅 签字日期：M7年翻弓J日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下 事项： l、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许 论文被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中 国学术期刊(光盘版)电子杂志社用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》， 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 彰数． 导师签字： 签字日期： 洳1年如a1日 签字日期： 如JI午上月弓1日 仿刺参(Apostichopusjaponicus)微卫星标记的开发及应用摘 仿刺参(Apostichopusjaponicus)微卫星标记的开发及应用 摘 要 仿刺参(Apostichopus japonicus)又名刺参，主要分布于我国北方、日本、 朝鲜半岛及俄罗斯的远东地区，由于具有较高的食用和养生保健价值，迅速成为 我国海水养殖的重要品种。培养抗逆性高、生长速度快的新品种是保持刺参养殖 业健康与可持续性发展的有效途径，而飞速发展的分子标记辅助育种技术为优良 品种的快速培育提供了理论基础和实践经验。本研究以仿刺参为主要研究材料， 探讨了仿刺参微卫星标记的有效筛选方法及微卫星标记在仿刺参标记辅助育种 中的应用。 1．仿刺参微卫星标记的筛选和评价 本研究利用EST文库筛查法和富集文库．菌落原位杂交法筛选得到了仿刺参 的多个微卫星序列。利用至少48个仿刺参个体对全部位点进行了评价，结果共 获得了276个多态性良好的微卫星标记。其中通过EST文库筛查法获得了59个 多态性微卫星位点，不同的位点获得的等位基因数为2～10个不等，平均每个位 点扩增得到4．8个等位基因，观测杂合度和期望杂合度的范围分别为 0．000～0．900和0．202,,-0．890；通过富集文库一菌落原位杂交法获得了217个多态 性位点，全部位点获得的等位基因数目范围为2～15个，平均每个位点扩增得到 6．8个等位基因，观测杂合度和期望杂合度的范围分别为0．000-1．000和 O．180--0．948。这些微卫星标记将成为仿刺参群体遗传学研究、微卫星遗传连锁图 谱构建、经济性状的QTL定位和分子标记辅助选育等工作的有力工具。 谱构建、经济性状的QTL定位和分子标记辅助选育等工作的有力工具。 2．全基因组扩增技术在仿刺参微卫星标记分型中的应用 在基因型的检测过程中，仿刺参幼虫由于个体大小的限制而无法为大量位点 的PCR扩增提供足量的模板。为了解决这一问题，本实验采用MDA全基因组 扩增技术对仿刺参耳状幼虫进行了全基因组扩增，并评价了此方法的扩增效率和 保真性，为通过MDA方法从仿刺参幼虫中获得大量DNA以满足分子标记分析 的需要做好了技术准备。选用了仿刺参一个F1代全同胞家系的2个亲本和30 个处于大耳期的幼虫为实验材料，使用QIAGEN Repli—g UltraFast Mini Kit全基 因组扩增试剂盒对子代幼虫进行全基因组扩增。琼脂糖凝胶电泳与紫外分光光度 计检测显示，得到的基因组DNA片段较为完整，每次反应可以获得的DNA总 量在1000ng左右。以这些DNA为模板，随机扩增了50对微卫星引物，获得了 1500个基因型。与亲本基因型进行比对的结果显示，在1500个基因型中有7个 基因型出现了错误，占全部基因型数目的0．47％。在错误的基因型中，有4个为 等位基因增加、2个为等位基因丢失、1个为等位基因片段长度错误。本研究的 结果表明，通过MDA技术对仿刺参幼虫进行扩增，可以得到优质、足量的DNA， 这些DNA能够进一步的应用于微卫星标记的分析中。 3．微卫星标记在仿刺参家系鉴定中的应用 本研究使用多个微卫星标记，在仿刺参(9早)×(18)、(10早)x(10艿)两个 关联家