P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响.PDF

微生物学通报 FEB 20, 2010, 37(2): 161−165 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 P197E 与ep8 叠加突变对扩展青霉脂肪酶热 稳定性的影响 刘燕雅 黄平 司圣乾 陈彦 林琳* ( 350108) 摘 要: 为提高脂肪酶的热稳定性, 作者利用重叠延伸 PCR 对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体 外定点突变, 构建了P197E ( 即将第197 位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8 叠加突变的重 组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E 。将该质粒电转化至毕赤酵母Pichia pastoris GS115 中, 进行异源表达。 与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8 的酶学性质比较, 结果表明: 叠加突变体PEL-ep8-P197E 在40°C 温育处理30 min 后, 残余酶活分别比野生型PEL 和随机突变体PEL-ep8 提高了42.13%和37.3%。 叠加突变体PEL-ep8-P197E 的Tm 值为41.51°C, 比野生型酶PEL 提高了2.81°C, 比随机突变体脂肪 酶PEL-ep8 提高了2.25°C 。通过对脂肪酶PEL 的叠加突变, 提高了该酶的热稳定性, 并为结构与功 能的进一步研究提供了材料。 关键词: 扩展青霉脂肪酶, 叠加突变, 热稳定性 Improving of the Thermostability of Penicillium expansum Lipase by Creating Mutation P197E * LIU Yan-Ya HUANG Ping SI Sheng-Qian CHEN Yan LIN Lin (College of Life Sciences, Fujian Normal University, Fuzhou, Fujian 350108, China) Abstract: In order to improve the thermostability of Penicillium expansum lipase (PEL), a mutation P197E was created by site-directed mutagenesis. The mutation is generated by overlap extension PCR using the cDNA of a single site mutant lipase ep8 as the template and two special primers that corresponding to muta- tion P197E. Recombinant vector pPIC3.5K-ep8-P197E which contain double-mutant genes was constructed and electroporated into