新洁尔灭消毒液消毒效果验证.doc

新洁尔灭消毒液消毒效果验证 摘要：目的：评估新洁尔灭消毒液的消毒效果。方法：通过中和剂中和效果试验和消毒剂定量悬浮试验来验证。结果：三次独立的平行试验均能够在10分钟内使所有试验菌的数量至少下降99.99%（至少下降4个对数单位）。结论：新洁尔灭消毒液的消毒效果符合使用要求，能够用于洁净区域日常的清洁消毒。 关键词：消毒效果 中和剂 定量悬浮 新洁尔灭（苯扎溴铵）：是一种阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂。用于皮肤、黏膜和小面积伤口的消毒。新洁尔灭为复方制剂，主要成分为苯扎溴铵，辅料为纯化水。本品为无色至淡黄色的澄明液体，最低浓度为0.1%。 1、材料 1.1 培养基及试剂 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、组氨酸、吐温80、卵磷脂、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、新洁尔灭消毒液 1.2 试验菌 金黄色葡萄球菌【CMCC（B） 26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B） 63501】、大肠埃希菌【CMCC（B）44102】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】 2、方法 2.1 培养基配制方法 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养、改良马丁琼脂培养基按中国药典附录培养基及其制备方法项下配制。 2.2 中和剂和稀释液： 2.2.1 稀释液 0.03mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.2～7.4，下称PBS） PBS配制方法：将磷酸氢二钠2.84g与磷酸二氢钾1.36g溶解于1000ml纯化水中，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用 0.9%氯化钠溶液：称取0.9g氯化钠，溶解于1000 ml纯化水中，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。 2.2.2 中和剂 在每升PBS缓冲液中加入10g组氨酸、50ml吐温-80、5g卵磷脂，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。 2.3 菌液制备：（菌种要求不得超过5代，采用适宜的方法保存） 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌的斜面培养物，加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种洗脱。然后吸出菌液（用管口带有薄的棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，制成均匀菌液（菌液浓度不得低于106cfu/ml）。 取白色念珠菌新鲜培养物少许至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养2天，加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种洗脱。然后吸出菌液（用管口带有薄的棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，制成均匀的菌液（菌液浓度不得低于106cfu/ml）。 2.4 方法： 2.4.1 中和剂中和效果试验： 2.4.1.1 菌液组： 用PBS对制备的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌菌悬液进行1ml→9ml的10倍系列稀释并用平皿计数法进行活菌计数，制成每毫升小于100cfu的菌液。取此金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌菌液1ml分别加入无菌培养皿中，注入约15～20ml温度不超过45℃的融化营养琼脂培养基，混匀，30～35℃培养48小时后计数，每种菌液平行做2个平板。 用PBS对制备的白色念珠菌悬液进行1ml→9ml的10倍系列稀释并用平皿计数法进行活菌计数，制成每毫升小于100cfu的菌液。取此白色念珠菌菌液1ml分别加入无菌培养皿中，注入约15～20ml温度不超过45℃的融化玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，23～28℃培养3天后计数，每种菌悬液平行做2个平板。 2.4.1.2 试验组（以金黄色葡萄球菌为例） 将消毒剂1.0ml与中和剂9.0ml混合，制成中和产物（中和剂与消毒剂作用后的产物）溶液，再按以下步骤分组进行。 第一组：取消毒剂4.5ml于试管中，加入0.5ml制备好的金黄色葡萄球菌菌悬液，混匀，作用10分钟，吸取此混合液0.5ml于装有4.5mlPBS的试管中，混匀，作用10分钟后，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入约15～20ml温度不超过45℃的溶化营养琼脂培养基，混匀，30～35℃培养48小时后计数，平行做2个平板。 第二组：吸取消毒剂4.5ml于试管中，加入0.5ml制备好的金黄色葡萄球菌菌悬液，混匀，作用10分钟后，吸取此混合液0.5ml于装有4.5ml中和剂的试管中，混匀，作用10分钟后，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入约15～20ml温度不超过45℃的溶化营养化物琼脂培养基，混匀，30～35℃培养48小时后计数，平行做2个平板。 第三组：吸取中和产物4.5ml于试管中，加入0.5ml制备好的金黄色葡萄球菌菌悬液，混匀，作用10分钟，吸取此混合液0.5ml于装有4.5mlPBS的试管中，混匀，作用10分钟，用PBS 做10倍系列稀释，选择适宜稀释度菌悬液，各吸取1ml加