酶的抑制作用..ppt

抑制剂对酶反应的影响 * 主要内容 例 题 4 可逆抑制剂及其动力学 2 概 述 3 1 不可逆抑制作用及机理 3 3 * 一、概 述 定义：能降低酶的活性，使酶促反应速率减慢的物质。 作用： 1、酶的抑制剂 （1）酶的失活作用： （2）酶的抑制作用： 凡使酶蛋白变性而引起酶活力下降或完全丧失的作用。 当酶促反应中加入某种抑制剂时，酶活力下降，但酶蛋白不变性的作用。 ＊特点：抑制剂有不同程度的选择性， 变性剂没有选择性 金属离子、CO、H2S、HCN、氟化物、有机阳离子、碘代乙酸、乙二胺四乙酸（EDTA）以及表面活性剂。 重要的 抑制剂 * 2、抑制剂的分类 不可逆抑制剂 按作用方式 可逆抑制剂 专一性： 仅仅和活性部位的有关基团反应 非专一性： 可以和一类或几类的基团反应 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 一、概述 * 3、抑制剂的特点 在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡 态相似。 能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形比 较稳定的复合体或结合物。 图1 酶与底物或抑制剂结合的中间物 一、概述 * 1、可逆抑制 二、可逆抑制剂及其动力学 定义：抑制剂与酶非共价键方式结合，引起酶活性的 下降或丧失，在用透析等方法除去抑制剂后, 酶的活性又能恢复。 不同浓度可逆抑制剂存在时 初速度和酶浓度关系曲线 1-无抑制剂 2-不可逆抑制剂 3-可逆抑制 * 2、可逆抑制动力学 （1）酶的竞争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竞争， 与酶活性中心结合。 当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外 ，其结果是酶促反应被抑制了。 竞争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞 争能力来消除。 二、可逆抑制剂及其动力学 * 2、可逆抑制动力学 （1）酶的竞争性抑制 二、可逆抑制剂及其动力学 * 动力学公式推导： 根据质量作用定律： ([E0]-[ES]-[EI])[S]=Km[ES] ([E0]-[ES]-[EI])[I]=Ki[EI] 解出[ES]并消去[EI]： 由于vi=K[ES],因此： 由于vm=K[E0],因此： 二、可逆抑制剂及其动力学 * 动力学公式推导： 由结果可知： 若[S] ,Vi接近于或等于Vm； 若Ki小而[I]大，则有抑制作用，抑制程度取决于[S]。 二、可逆抑制剂及其动力学 倒数变形后： * 动力学公式推导： A. 抑制程度与[I]成正比，与[S]成反比 [I]一定，增加[S]，可减少抑制程度。 [S]一定，增加[I]，可增加抑制程度。 B. 在一定[I]和[S]下， Ki越大，抑制作用越小，Km值愈 大，抑制程度愈大。 二、可逆抑制剂及其动力学 * 2、可逆抑制动力学 （2）非竞争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合引起酶分子构象变化，并导 至酶活性下降。 由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以 称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 二、可逆抑制剂及其动力学 * 0 [s] 1 v 1 Km 1 Vm 1 无抑制剂 非竞争性抑制的动力学特征 [I] Vmax↓ Km不变 抑制程度决定于[I]和Ki ，与底物的Km和[S]无关。 二、可逆抑制剂及其动力学 * 2、可逆抑制动力学 （3）反竞争性抑制 抑制剂不能与游离酶结合，但可与ES复合物结合并阻止产物生成，使酶的催化活性降低，称酶的反竞争性抑制。 机理： 二、可逆抑制剂及其动力学 * 三种可逆性抑制作用的比较 无抑制剂 竞争性 抑制 非竞争性 抑制 反竞争性 抑制 E E、ES ES 与I结合的组分 Km 增大 不变 减小 表观Km Vm 不变 降低 降低 最大速度 二、可逆抑制剂及其动力学 * 三、不可逆抑制作用及机理 2、不可逆抑制机理 E + I → EI 不可逆抑制剂(I)通常以共价键方式与酶(E)的必需基团进行不可逆结合形成酶-抑制剂复合物(EI)而使酶丧失活性。 作用机理: 抑制作用随着抑制剂浓度的增加而逐渐增强，当抑制剂的量达到足以和所有的酶结合，则酶的活性就完全被抑制。 * 四、例 题 某酶的Km=4.7×10-5mol/L，如果Vm=2.2×105mol/(L·min)，底物浓度为2×10-4mol/L，抑制剂的解离常数为3×10-4mol/L。在竞争性抑制与非竞争性抑制剂的浓度均为5×10-4mol