肠道病毒71型及甲乙型肝炎联合疫苗免疫原性的初步评价病原生物学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文2．3．2小鼠血清中Anti-HBs水平 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文 2．3．2小鼠血清中Anti-HBs水平 ．18 2．3．3小鼠血清中Anti．HAV水平 22 2．4小鼠外周血T淋巴细胞亚群分群分析 25 2．5 CBA测定IFN-y、TNF、IL-2、IL-4,IL．5细胞因子结果 ．30 2．6小鼠脾脏淋巴细胞抗原特异性lF狮分泌水平 ．37 2．7免疫后小鼠的生长状况 40 3讨论 41 参考文献 44 附录I基本实验操作说明 一47 附录Ⅱ溶液配制 。53 附录Ⅲ实验相关图片 。54 致谢 66 个人简历 67 独创性声明 。韶 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文摘要 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文 摘要 目的初步评价肠道病毒71型(Enterovi rus 71，EV71)、甲型肝炎(甲肝)病毒 (Hepatitis A，HAV)与乙型肝炎(乙肝)病毒(Hepatitis B，HBV)联合疫苗中三 种抗原之间的相互作用及其免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平。方法将EV71 灭活疫苗抗原、HAV灭活疫苗抗原及重组HBV疫苗抗原(HBsAg)按常规剂量， 以直接吸附法吸附AI(OH)3佐剂，配制成EV71一HAV-HBV联合疫苗，并设二联疫 苗组、单苗组、佐剂对照组和空百对照组(PBS)。分别于0、28d各经腓肠肌免 疫BALB／C小鼠一次，于初免后2、4周和第二剂免疫后2、4、8、16、28周经尾 动脉采血，分离血清。采用微量中和试验检测血清EV71中和抗体效价；采用酶联 免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中 Anti—HBs、Anti—HAV水平。于初免后3、4周和第二剂免疫后第1、2、4周经尾动 脉采血，用流式细胞仪检测小鼠全血中淋巴细胞亚群CD4+／CD8+的百分率及小鼠血 清中TNF、IFNy、IL一5、IL一4、IL．2含量，同时取小鼠脾脏，分离得到脾单个核细 胞(mononuclear cell，MNC)，采用酶联免疫斑点试验(enzyrne-¨nked immunospot assay,ELISPOT)检测MNC中抗原特异性IFNy的分泌水平。结果各疫苗组小鼠 血清Anti—HBs和Anti—HAV阳转率分别在第二剂免疫后第2周和第4周达1 00％， EV71中和抗体只有部分组达到100％；佐剂对照组和空白对照组抗体均无阳转。 初免后第4周，疫苗组CD3+、CD4+细胞百分率较高，第5周均有不同程度的下降： CD8+细胞百分率第3周最高，第4周有不同程度的下降。第二剂免疫后第1周， 三联疫苗组5种细胞因子水平较其他组高，提示三联疫苗组在第二次抗原刺激时能 较早的产生细胞因子相关的免疫应答。各疫苗组分泌IFNT的斑点形成细胞(spot forming cell，SFC)数在5个检测时点有所波动，第二剂免疫后第1周，HBsAg多 肽和EV71全病毒刺激产生的IFN7分泌阳转率均达到100％，同时SFC数也达到 峰值；HAV全病毒刺激产生的IFN一1，水平在5个时间点的检测结果均为阴性：佐剂 和空白对照组的ELISPOT检测结果均为阴性。结论一定剂量的EV71．HAV-HBV 联合疫苗具有较好的免疫原性，可迅速诱导小鼠产生良好的体液免疫应答和一定水 平的细胞免疫应答，三种抗原间未发现相互作用。 关键词：肠道病毒71型，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，联合疫苗，体液免疫， 细胞免疫 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文Abstract 中国医学科学院北京协和医学院硕士生论文 Abstract objective To primarilY evaluate the i riteraction of three antigens n enterovirus 71 (EV71)and hepatitis Aand B combined vacciRe as we¨as lhe specific immune response IeveI．nduced by the vaccine in mice．Methods EV71．HAV and HBV combined vacciRe(EV71．HAv-HBV)was formulated by direction adsorption of inactivated EV71，HAV vaccine antigen and HBsAg，at routine dosages，onto aIuminum hyd roxide adjuvant，with which BALB／c