uchl1对trkb的去泛素化调节及其在学习记忆中的作用神经生物学专业论文.docxVIP

CONTENTSAbstract CONTENTS Abstract in Chinese ． ． ．．．．． 1 Abstract in En91ish ．3 Symbolic description ．5 Inn·oduction ．6 】、，Iaterials ．．9 】Ⅵethods ．．． ．．．．． ． ．16 Results ．． ． ．． ． ．． ．．27 Discussion ．．． ． ．． ．． ．．．． ．43 Re{-erences ．．． ． ．． ．46 Acknowledgement 50 Achievements ． 51 万方数据 山东大学硕士学位论文UCHLl对Trl出的去泛素化调节及其在学习记忆中的作用 山东大学硕士学位论文 UCHLl对Trl出的去泛素化调节及其在学习记忆中的作用 硕士研究生：郭云云 专业：神经生物学 导师：苏擘副教授 中文摘要 一、研究目的和背景 脑源性神经营养因子BDNF通过受体酪氨酸激酶B(TrkB)在调控神经元存 活、生长发育、突触可塑性等方面发挥重要作用[1]，而TrkB的翻译后修饰直接 影响其生物学功能的发挥。己知TrkB可被泛素化[2]，但是其调控分子和功能尚 不清楚。 UCHLl属泛素羧基水解酶家族，在脑中含量丰富，已有报道UCHLl参与 神经元突触可塑性的调控【3】。我们前期质谱分析发现uCHLl可与TrI(B结合， 提示UCHLl可能参与调控TrkB。本课题主要对UCHLl是否调控TrkB去泛素 化及其生物学功能进行深入研究。 二、实验方法 为研究UCHLl对TrkB去泛素化调节及对其生物学功能的影响，我们通过 构建ucHLl或TrkB相关质粒，免疫共沉淀分析uCHLl与TrkB的相互作用及 UCHLl对TrkB泛素化的调节。通过免疫荧光定量分析、膜表面可裂解生物素检 测TrkB受体分布及内吞和再循环等实验，分析UCHLl对TrkB去泛素化调控对 TrkB内吞、再循环的影响。我们还通过contextual fear conditioning(CFC)、旷 场(open field)分析UCHLl对TrkB去泛素化调控在小鼠学习记忆和运动能力 中的作用。 三、实验结果 1．TrkB与UCHI．1有相互作用 免疫共沉淀实验(co—immunoprecipiL町ion，C0一IP)证明1’rkB—FL与Tl均可与 UCHLl相互作用。进一步利用Co—IP，发现TrkB中JMl区和UCHLl中75—85 氨基酸是两者结合的必要和充分条件。 2．UCHLl调控TrkB的去泛素化过程 万方数据 山东大学硕士学位论文通过P4D1及FKl抗体检测，我们发现Trl(B主要为多个位点单泛素化。通 山东大学硕士学位论文 通过P4D1及FKl抗体检测，我们发现Trl(B主要为多个位点单泛素化。通 过过表达、干扰ucHLl以及体外去泛素化检测等验证UCHLl可调节TrkB的去 泛素化，并且主要调控488位点的去泛素化。 3．UCHLl参与调控膜表面TrkB内吞以及内吞之后的转运过程 ‘I’A1-UCHLl 75—85多肽可通过抑制UCHLl与1’rkB．FL的结合进而促进 BDNF诱导的TrkB泛素化，进而促进膜表面’I’rkB的内吞，而内吞之后的再循环 TrkB减少，更多TrkB内吞后降解，最终使得TfkB及其下游信号通路受到抑制。 4．TAT-UCHLl 75．85可通过抑制UCHLl与7I岫的结合降低C57小鼠的学习记 忆能力 通过CFC测试实验发现体内注射TA-T-UCHLl 75—85小鼠CFC过程中获得受 损。 四、结论 我们发现UCHLl可通过与TrkB．FL相互作用调节1’rkB的去泛素化，并影 响其BDNF诱导的膜表面TrkB的内吞以及内吞之后的降解和再循环过程，从而 影响BDNF。TrkB下游信号通路，进而影响小鼠的学习记忆能力。 关键词：TrkB：UCHLl；泛素化；膜受体；信号转导 万方数据 山东大学硕士学位论文UCHL 山东大学硕士学位论文 UCHL 1regulated TrkB deubiquitination aJld played an impoIrc锄t role in leaming a11d memo巧 Post掣aduate：YIm—Y．un Guo Supervisor：Associate professor Bo Su Specialt)，：Neurobi0109y ABSTRACT Backgroud It has been well kno、vn that Brain deriVed neurotropllic factor(BDNF)plays an imponant role in regulati