病毒及人源mirnas调节巨核细胞增殖与发育的研究内科学心血管专业论文.docxVIP

博士学位论文ebv—miR-BART6．3p下调巨核细胞miR-1 博士学位论文 ebv—miR-BART6．3p下调巨核细胞miR-1 85．5p表达，进而使后者靶标ABCG4 表达升高。 第二部分：hsa-miR-146参与巨核细胞增殖及其与ITP预后相关性的 研究 目的： 证实hsa-miR．146参与巨核细胞增殖并与ITP预后密切相关 方法： 收集10例脐血单个核细胞分离CD34+造血祖细胞扩增为巨核细胞，根据参考 文献选定浓度为10uM达沙替尼处理。 应用流式细胞仪分析各组CD41阳性率差异，鉴定巨核细胞。 ≯应用吉姆萨染色光镜分析巨核细胞形态学变化，透射电镜分析巨核细胞超微 结构差异。 应用miRNA芯片分析达沙替尼处理前后巨核细胞miRs的表达变化。对比前 期ITP患者血浆及AB正常血浆孵育巨核细胞miRs表达谱，通过聚类分析发现 8种hsa-miRs差异在2．5倍以上。 收集10例ITP患者血浆，QRT-PCR法验证芯片结果，发现miR-146最为稳定， 扩大ITP患者例数为56例，分析其动态变化与预后相关性。 结果： 达沙替尼促进巨核细胞增殖及分化，但抑制血小板生成。流式细胞仪检测达 沙替尼组CD41表达率为40．8±3．22％，对照组为32．6-t-4．71％。免疫组织化学 法分析两组巨核细胞CD41表达率，对照组CD41阳性细胞率为31．28-t-5．67％， 达沙替尼组为38．92+6．23％。吉姆萨分析巨核细胞形态学发现，对照组巨核 细胞胞体巨大，胞核不规则，发育成熟，细胞周围有比较成熟的血小板成簇 分布。达沙替尼组巨核细胞体积接近正常对照组，胞核也不规则，胞浆较为 丰富，胞浆内仅有少许不成熟巨大血小板颗粒。透射电镜结果显示对照组板 障结构明显多于达沙替尼组。巨核细胞集簇实验显示，接种1000个细胞在6 III 万方数据 摘要孔板内，对照组生产克隆数为447 摘要 孔板内，对照组生产克隆数为447 4-69，达沙替尼组为527 4-39。 达沙替尼用药与否的巨核细胞miRs芯片与ITP患者血浆或正常AB血浆孵育 巨核细胞miRs芯片聚类分析发现8个hsa-miRs表达差异均在2．5倍以上。 ≯收集ITP患者血浆，QRT-PCR验x证芯片结果，miR-146与ITP疾病进展密切相 关。 结论： 达沙替尼促进巨核细胞增殖、抑制产板，上调miR-146表达。 miR-146与rrP预后密切相关。 关键词微小RNA，EB病毒，miR-146，ebv-miR-BART6，巨核细胞，免疫性血小板减少症 IV 万方数据 博士学位论文The 博士学位论文 The study on miRNAs derived from virus ’·^ Or human modUlatlng prollteration ancl development of megakaryocytes Name：Deng Lan Supervisor：Professor Li Yuhua ABSTRACT PART 1．The Study of the Development of Megakaryocytes Modulated by Viral mieroRNA objective To study the effect of viral ebv-miR—BART6—3p on the proliferation， differentiation and development of megakaryocytes，and to investigate the probable mechanism． Method 》The mononuclear cells were collected from 20 umbilical cord blood samples． CD34+hematopoietic progenitor cells were isolated from the mononuclear cells and amplified into megakaryocytes． Express vector of Ebv—miR-BART6 was constructed and transfected into CD34+ hematopoietic progenitor cell that was then cultured into megakaryocytes． The difference of CD41+rates WaS compared between the groups by flow cytometric analysis and immunohistochcmistry analysis．Megakaryocyt