番茄中与病害密切相关mirna的功能分析生物化工专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 MicroRNA(miRNA)是一类在生物体内普遍存在的长度约22nt的内源性非编码小 分子RNA。近年的研究表明，miRNA在植物与病原物互作过程中起着重要的调节作用。 当病原物侵染番茄时，常造成严重的病害，给番茄的生产带来较大的经济损失。虽然， 目前关于番茄中与病害相关miRNA已有研究，但是，关于番茄中与病害密切相关miRNA 的研究还不系统。基于上述状况，本研究利用生物信息学方法，挖掘到番茄中与病害密 切相关的miRNA，并通过生物学实验方法探究了关键miRNA的功能。 首先，本研究通过搜集文献和miRBase数据库，找到了番茄中34个miRNA的表 达与病害相关，采用生物信息学方法预测它们的靶基因，利用Cytoscape软件构建miRNA 问的调控网络，从中筛选出13个与病害密切相关的miRNA。根据各miRNA之间关联 性的大小及其与病害相关靶基因的多少，又进一步选出miRl69、miR482、miR5300、 miR6024、miR6026和miR6027共6个关键miRNA，并对其进行了靶基因功能分析、 启动子分析及实时定量PCR验证，为全面深入研究miRNA的作用机制奠定了基础。 其次，挑出最为关键的miR482b和miR6024作为本文的重点研究对象，采用实时 定量PCR技术分析了二者的组织特异性，以及在病原菌和SA胁迫下两个miRNA与其 靶基因的表达模式。结果发现，两个miRNA在叶中的表达量均高于根和茎中的，且均 能对上述胁迫做出响应，并与各自靶基因呈负相关。暗示这两个miRNA可能通过调控 靶基因的表达进而参与番茄对逆境的胁迫响应过程。 最后，为了进一步探究miR482b和miR6024的功能及作用机制，本文分别克隆了 番茄中的MIR482b和MIR6024基因，成功构建了相应的过表达载体及瞬时转化体系， 并获得了转基因番茄植株。经检测发现，转基因番茄中miR482b的表达量上调，其相应 靶基因的表达量出现不同程度的下调，且提高了病原菌对番茄的致病能力。多项结果表 明miR482b和miR6024可能在番茄响应逆境胁迫过程中均起着重要作用。 总之，本研究通过生物信息学与生物学实验相结合的手段，预测、挖掘及鉴定了番 茄中与病害密切相关的miRNA，并对其进行了相关功能分析。不仅可以加深人们对植 物与病原物互作机制的了解，同时也可为番茄的抗病育种奠定基础。 关键词：miRNA；靶基因；番茄；病原物 万方数据 番茄中与病害密切相关miRNA的功能分析Functional 番茄中与病害密切相关miRNA的功能分析 Functional analysis of miRNAs closely associated with the pathogenicity in tomato Abstract MicroRNAs(miRNAs)are a class of endogenous，noncoding RNAs of 22 nt and widely exist in organism．The recent studies have shown that，miRNA plays an important role in plant and pathogen interaction．When pathogen infect with tomato will cause devastating disease，which bring great economic losses to the production of tomato．Although，at present the research on tomato miRNA related with disease has exist，but the research on miRNA which closely related with the disease in tomato is not system．Based on the above situation，this study by using bioinformatics methods，mining and identified miRNAs that closely related with the disease in tomato，then，we analysed the function of key miRNAs through biological experiment． Firstly，by collecting the literature and miRBase，we found that 34