深海热液口微生物病毒互作及其次生代谢产物抗肿瘤转移活性的研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的 研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 学位论文作者签名： Jfl面杀左 签字日期：为By年 y月v／ 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙婆太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论 文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝婆太堂可以将学位论文的全 部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) -，^ 一，’， 学位论文作者签名： b b恢 反 导师签名： 签字日期：为f5年，月1日 签字日期：沙r歹年7月77日 4 万方数据 目录摘要 目录 摘要 9 Abslract ．13 引言 17 1．1深海热液口生态系统 17 1．1．1深海热液口生态系统的环境特征 ．17 1．1．2深海热液口生态系统的发现与分布 18 1．2深海热液口徽生物群落结构 19 1．2．1深海热液口细菌的群落结构 。21 1．2．2深海热液口古菌的群落结构 21 1．3海洋噬曹体与宿主问的相互作用 ．22 1_3．1海洋噬茵体的基本特征及分类 23 1．3．2海洋噬菌体对宿主群落结构的调节作用 24 1．3．3海洋噬菌体对宿主代谢的影响 26 1．4海洋微生物抗肿瘤次生代谢产物研究进展 27 1．4．1海洋微生物次生代谢产物的特征 。27 1．4．2肿瘤发生过程中的代谢改变 ．28 1．4．3海洋微生物抗肿瘤活性次生代谢产物的研究 。32 1．5本文研究的目的和意义 33 材料与方法 3 5 2．1材料 ．3 S 2．1．1试验材料 。35 2．1．2细胞系 37 2．1．3试验试剂 38 2．1．4数据分析软件 。39 2．1．5引物序列 39 2．1．6设备与仪器 39 2．1．7主要培养基与常用溶液 42 2．2试验方法 。46 结果与分析 。64 3．1东太平洋、南大西洋和西南印度洋深海热液口细首多样性研究 ．64 5 万方数据 3．1．1深海热液口细菌基因组提取及细菌16S 3．1．1深海热液口细菌基因组提取及细菌16S rRNA序列扩增 65 3．1．2深海热液口细菌16 rRNA高通量测序结果分析 66 3．1．3深海热液口硫化物细菌多样性分析 ．71 3．1．4深海热液口水体与硫化物的细菌多样性比较分析 74 3．1．5深海热液口底栖动物肠道与硫化物的细菌多样性比较分析 。76 3．2深海燕液口病毒与徽生物互作研究 ．．77 3．2．1热液口细菌多样性 78 3．2．2热液口病毒的分离纯化 80 3．2．3热液口病毒宏基因组DNA的提取与扩增 82 3。2。4热液口病毒宏基因组序列分析 84 3．2．5热液口微生物宏基因组序列分析 86 3．2．6热液口病毒和微生物的代谢分析及代谢补偿机制 89 3．3噬苗体感染相关的嗜热首次生代谢产物对肿瘤转移的抑制作用 ．94 3．3．1抑制肿瘤细胞转移的次生代谢产物的筛选 。94 3．3．2 L·正亮氨酸及其衍生物对胃癌和乳腺癌细胞转移的抑制作用 103 3．3．3 L．正亮氨酸抑制肿瘤细胞转移的机制 。118 讨论 ． 124 小结与展望 131 参考文献 ．1 34 I时录 ．145 致谢 。． 147 6 万方数据 ContentChinese Content Chinese abstract ．．9 English abstract ．13 Introduction ．17 1．1The deep-sea hydrothermal vent ecosystem ．．17 1．1．1 Environmental characteristics of deep-sea vent ecosyStems ．1 7 I．1．2 Discovery and distribution ofdeep·-sea vents．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．1 8 1．2 The microbial community indeep-sea hydrothermal vent 19 1．2．1The bacterial community in deep-sea hydrothermal vent 21