《SCT3024-2004-腹泻性贝类毒素的测定生物法》.pdfVIP

ICS 67.050 B50 Sc 中华 人 民共 和 国水 产 行 业 标 准 SC/T3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定 生物法 Determinationofdiarrhoeashellfishpoison Bioassay 2004一01一07发布 2004一03一01实施 中华人民共和国农业部 发 布 SCAT3024-2004 ou 青 本标准参考了日本厚生省推荐使用的腹泻性贝类毒素的测定方法。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所。 本标准主要起草人：王联珠、袁骥、李晓川、冷凯良、陈亚瞿、蒋玫。 SCAT3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定 生物法 1 范围 本标准规定了腹泻性贝类毒素 D（SP）的测定方法— 生物法。 本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素 D（SP)的测定。 2 原理 用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后，再以1％吐温-60生理盐水溶解 残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力。 3 试剂和材料 Q I ︺ 丙酮 分（析纯）。 Q C ／ 口 J 乙醚 分（析纯）。 Q q 口 口 1％吐温一60生理盐水：称取1.0g吐温-60，溶于生理盐水 0（.8%NaCl）中，并定容至100.0 mL. 4 仪器和设备 4.1旋转蒸发器。 4.2 均质器。 4.3 磨口烧瓶：圆底，500mL,100mLo 4.4 布氏漏斗：0100二 。 4.5 分液漏斗：具塞，500mLo 4.6 天平：感量0.1go 4.7 刻度试管：10mL，具塞。 4.8 冰箱：0℃一5℃和一15℃一一20`C。 4.9 注射器：1mLo 4.10注射器针头：8#。 4.11小鼠：体重为16g--20g的健康1Clx系雄性小鼠。 5 检样的制备 5.1 生鲜带壳的贝类 a)用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉， 切勿割破肉体； b)收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用； c）注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺 又（称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。 开壳前不能加热或用麻醉剂。 5.2 冷冻贝类 在室温下，使冷冻的样品 （带壳或去壳的）呈半冷冻状态，按 5.1方法清洗、开壳、淋洗、 SC/T3024-2004 取肉。 5.3 取样 a)可以切取中肠腺的贝类 扇（贝、贻贝、牡a等），称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺， 将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板； b)对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作 为检样； c)为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5％的次氮酸钠 溶液中浸泡 1h以上，以使毒素分解；废弃的提取液等也应用5％的次氯酸钠溶液处 理 。 6 提取 6.1取5.3a）处理的中肠腺，或5.3b)处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2min. 6.2 加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍量 丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液。 6.3 将抽提液移人500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩 旋（转蒸发器，56r-）去除丙酮，直至在液体 表面分离出油状物。 6.4 将浓缩液移入分液漏斗内，以100ml--200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部