间皮素在卵巢上皮性癌诊断病情监测中的价值评价及在顺铂耐药中的作用和机制研究外科学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 一躲椭翩虢甏万二一翱l 一躲椭翩虢甏万二一翱 l 研究生躲刳畸 导师擗 月．／ 日 目 目 录 中文摘要 1 英文摘要 8 英文缩写 “ ．18 研究论文间皮素在卵巢上皮性癌诊断、病情监测中的价值评价及在顺铂 耐药中的作用和机制研究 引言々I商 ZU20 第一部分血清SMRP和HE4在卵巢上皮性癌诊断和病情监测中的临床应 用 前言日U舌 2323 材料与方法 24 结果；口刁 么026 附图 29 附表 31 讨{仑 33 小结 35 参考文献 35 第二部分siRNA介导的间皮素沉默在逆转卵巢癌顺铂耐药过程中的作用 前言日U吾 3939 材料与方法 40 结果 50 附图 54 讨{仑 63 小结 66 参考文献 ．66 第三部分siRNA介导的间皮素沉默联合顺铂治疗耐药卵巢癌裸鼠移植瘤 的效果观察 前言日lj舌 6969 材料与方法 69 结果 72 结果 72 附图 74 附表 77 讨论 78 小结 79 参考文献 79 结论 81 综述一 卵巢癌肿瘤标志物的研究进展 82 综述二 间皮素生物学功能的研究进展 92 致谢 102 个人简历 103 中文摘要间皮素在箩日巢上皮性癌诊断、病情监测中的价值评价及在顺铂耐 中文摘要 间皮素在箩日巢上皮性癌诊断、病情监测中的价值评价及在顺铂耐 药中的作用和机制研究 摘 要 卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer，EOC，简称卵巢癌)是女性生 殖系统常见的一种恶性肿瘤，致死率在妇科肿瘤中占首位，五年生存率仅 为30％。这是因为卵巢癌早期诊断困难，70％的患者确诊时已是晚期。而 且晚期患者在经过肿瘤细胞减灭术联合以铂类为基础的化疗后，虽然得到 缓解，但是60％的患者最终会复发，其中主要的原因是出现顺铂耐药。因 此临床亟需新的卵巢癌肿瘤标志物和解决顺铂耐药的新的途径。 间皮素(Mesothelin MSLN)是一种新发现的肿瘤细胞表面抗原，在 正常组织中通常仅表达在体腔表面的间皮细胞，在恶性间皮瘤、卵巢癌和 胰腺癌等恶性肿瘤中过表达。间皮素基因编码的间皮素蛋白是一种以糖基 磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上的糖蛋白，全长69KDa，可被蛋白水解酶分 裂释放出一个33KDa的可溶性蛋白，另外遗留下膜结合的蛋白(40KDa) 作为细胞粘附分子。可溶性间皮素相关蛋白(Soluble mesothelin related protein SMRP)是42．45KDa的蛋白质，可能为膜结合间皮素的蛋白水解 产物。由于SMRP可以释放入血且分子量明显低于卵巢癌标记物CAl25， 所以理论上灵敏度要高于CAl25，从而有希望成为卵巢癌早期诊断的标记 物。 目前的研究证实间皮素可促进肿瘤细胞的增殖，增强其粘附、迁移的 能力，但是还有很多生物学功能尚不可知。有研究发现间皮素在卵巢癌顺 铂耐药组织中明显高表达，且与不良预后相关，提示间皮素的表达与化疗 耐药有关。由此我们推断间皮素可能在卵巢癌顺铂耐药过程中发挥着重要 作用，有望成为顺铂耐药治疗的新的靶点。 本课题首先将间皮素与卵巢癌常用标志物CAl25和新发现的重要卵巢 癌标志物HE4做同期比较，并分别将三者联合检测，对间皮素的临床价值 作出客观评价。然后从基因水平和蛋白水平分别检测卵巢癌耐药细胞株间 皮素的表达。接着以SKOV3／cDDP细胞为例，应用RNAi技术沉默耐药 中文摘要细胞株表面间皮素的表达，进而通过 中文摘要 细胞株表面间皮素的表达，进而通过MTT药物敏感试验、集落形成试验 和流式细胞术来检测间皮素沉默后耐药细胞对顺铂敏感性的变化，并从耐 药蛋白表达的改变，细胞内谷胱甘肽水平等方面探讨间皮素在顺铂耐药方 面的可能作用机制。最后我们建立荷人卵巢癌耐药细胞株裸鼠移植瘤模 型，用包装有间皮素siRNA的慢病毒液联合顺铂进行治疗，在体内水平 进一步验证间皮素沉默后耐药卵巢癌组织对顺铂的敏感性，探讨间皮素沉 默逆转顺铂耐药的可能性，从而为卵巢癌的耐药逆转研究提供一个新的思 路。 第一部分血清SMRP和HE4在卵巢上皮性癌诊断和病情监测中的临床 应用 目的：比较血清SMRP和HE4在卵巢良恶性肿瘤和健康志愿者的分 布，结合CAl25，分析三种标志物单独和联合检测的诊断效能，探讨血清 SMRP和HE4在卵巢癌诊断和病情监测中的临床价值。 方法：用酶联免疫吸附法测定44例卵巢癌患者，56例良性卵巢上皮 性肿瘤患者和40例健康志愿者血清中的SMRP和HE4水平，化学发光法 测定血清CAl25，比较三种标志物在不同分组，卵巢癌不同病理类型、不 同分化级别、不同分期及良性卵巢上皮性肿瘤不同病理类型的分布，比较 三种标志物在卵巢癌术前术后的变化。绘制ROC曲线对三种标志物进行 诊断效能评