visudyne无动力疗法预防晶状体后囊膜混虫的实验研究眼科学专业论文.docxVIP

Visudyne光动力疗法预防晶状体后囊膜混浊的实验研究 Visudyne光动力疗法预防晶状体后囊膜混浊的实验研究 摘要 目的 观察Visudyne光动力疗法(PDT)对离体培养的兔晶状体上皮细胞 (RLECs)和人晶状体上皮细胞系(HI．ECs)的杀伤作用，确定杀伤LECs的最 佳PDT参数，探讨PDT在体外杀伤LECs的作用机理，评价PDT在兔眼术中应 用抑制后囊膜混浊(PCO)的有效性和安全性。 方法 (--)RLECs藏代培养和传代培养，HLECs系传代培养，透射电镜观察 细旎超微结构。MTT涟测定单纯激光、不同浓度光敏剂和PDT对RLECs和 HLECs的杀伤作用，并筛选最佳PDT参数。(二)流式纲胞仪Pl染色法分析 PDT对HLECs细胞周期的影响，Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡率， 透射电镜观察细胞形态变化。(三)兔眼晶状体超声乳化摘除后囊袋内注入含有 Visudyne的透明质酸钠，并行激光照射。术后6周和12周对PCO评估通过临床 观察(分别对纤维化型PCO和再生型PCO进行分缀)、照相、光镜组织学检查， 同时测量中央后囊膜厚度，邀镜观察角膜纛虹膜超微结构变化。 结果 (一)在体外成功培养兔RLECs。MTT检测结果显示：单纯激光对RLECs 和HLECs无杀伤作用。单纯光敏剂组：Visudyne浓度O．125_tg／ml，对细胞没有杀 伤作用，O．125g／mi，杀伤率呈浓度依赖性。PDT组细胞杀伤率呈一定的浓度依 赖性。(二)Visudyne光动力疗法作用于HLECs后，细胞周期分析显示G2期细胞 数增多，而S羯细麓数减少．。PDT后12h、24h和48h细脆凋亡率分别为 77。17+2。55％、93．13：t：1。14％幂1197。47+0．90％。扫描电镜观察见：激光光斑未照射 部位为正常HLECs，激光光斑照射部位细胞呈凋亡表现。(三)术后6周和12周， PDT治疗组和对照组比较：PCO程度明显轻，术后6周：纤维化型PCO齐n再生型 PCO分级两组之间有统计学显著性差异(氏O．001)，术后12周：两组之间比较： 纤维化NPCO分缀有统计学显著性差异(P=-O．0306)，再生型PCO分级无统计学 湿著性差异(芦◇．1888)。Soemmering环形成情况PDT治疗组明显较对照组轻。 PDT治疗组和对照组后囊膜厚度无差异(P=0。3619)。电镜观察显示正常角膜和 虹膜超微结构。结论 虹膜超微结构。 结论 (一)Visudyne光动力疗法对LECs可以产生相当强的杀伤作用。杀伤 晶状体上皮细胞的最佳参数为：当激光光斑直径5mm时，Visudyne O．125ug／ml， 激光波长689nm，光照剂量30J／era2，光照强度500mW／cm2，光照持续时间60s， 此时对RLECs和HLECs的杀伤率可达86．20％和88．80％。(二)Visudyne光动 力疗法对HLECs的杀伤机理为抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡，细胞凋亡是 PDT杀伤LECs过程中的一个早期重要事件。(三)Visudyne光动力疗法在兔眼 术中应用能有效抑制PCO，并有足够的安全性。 关键词 后囊膜混浊，晶状体上皮细胞，光动力疗法，Visudyne，体外实验， 细胞周期，凋亡，体内实验 The The Effect of Photodynamic Therapy with Visudyne on the Prevention of Posterior Capsule Opacifieation Abstract Objective’To investigate the cytotoxic effect of photodynamic therapy(PDT)with Visudyne on cultured rabbit lens epithelial cells(RLECs)and human lens epithelial cell lines(HLECs)．To determine the maximal effective safe dose of Visudyne+To study the mechanism of PDT—induced cytotoxicity in vitro．To evaluate the effect and safety of PDT on the prevention of posterior capsule opacification(PCO)in rabbit eyes· Methods《I)RLECs and HLECs were primary cultured and／or subcultured in vitro。 Ultrastrcture o