《SBT10315-1999-孢子数测定法》.pdfVIP

中华人民共和国专业标准 孢 子 数 测 定 法 SB/T 10315-1999 Enumeration of spore ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 本方法适用于酿造酱油半成品—菌种的孢子数测定。 1 仪器与试剂 a. 显微镜、血球计数板、盖片; b. 95%酒精、稀硫酸 (1 ∶10); c. 平天: 感量0.001g 。 2 操作方法 2.1 样品稀释:精确称取种曲或二级菌种1g (称淮至0.002g),倒入盛有玻璃珠的250mL 锥形瓶内,加95%酒精5mL,加无菌水20mL,加稀硫酸10mL,充分振摇,使分生孢子个个分散, 然后用多层纱布过滤、冲洗,务使滤渣不含孢子,稀释至500mL 。 2.2 制片:取稀释液1 滴,滴于血球计数板的计算格上,然后将盖片轻轻由一边向另一 边压下,使盖片与计数板完全密合,液中无气泡,用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液,静置 数分钟,待孢子沉降。 2.3 观察计数:用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子,在血球计数板上 处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到, 因而计数时必须逐格调动微细螺旋, 才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上,应一律取二边计数,而弃另二边, 以减少误差。 使用16 ×25 的计数板时,只计板上四个角上的4 个大格(即100 个小格) 。如果使用25 ×16 的计数板,除计四个角的4 个大格外,还需要计中央一大格的数目(即80 个小格) 。每 个样品重复观察计数不少于2 次,然后取其平均值。即为该样品种曲的孢子数。 3 计算 3.1 16 ×25 的计数板 n V 孢子数（个／克） =━━×400 ×10000 ×━━━ 100 G nV =4 ×10**4 ×━━ ……………………………(1) G 式中:n——100 小格内孢子总数,个; V——孢子稀释液体积,mL; G——样品重量,g 。 3.2 25 ×16 的计数板 n V 孢子数（个／克） =━━×400 ×10000 ×━━━ 80 G nV =5 ×10**4 ×━━ ……………………………(2) G 式中:n——80 小格内孢子总数,个; V——孢子稀释液体积,mL; G——样品重量,g 。 4 注意事项 4.1 称样要尽量防止孢子的飞扬。 4.2 测定时,如果发现有许多孢子结集成团或成堆,说明样品稀释未能符合操作要求。 因此必须重新称重、振摇、稀释。 4.3 生产实践中应用时,种曲以干物质计算。因而需要同时测定种曲水分,计算时样 品重量则改为绝干重量。 样品绝干重量＝G(1-W)…………………………………(3) 式中:G——样品重,g; W——样品水分的百分比含量,% 。 ━━━━━━━━━ 附加说明: 本标准由商业部副食品局提出。 本标准由上海市酿造科学研究所起草。 本标准主要起草人须凤高。 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 中华人民共和国商业部1987-11-20 批准 1988-07-01 实施