实例小麦特异种质资源分子生物学研究.doc

论文实例：小麦特异种质资源分子生物学研究 作者简介：魏育明，男，1971年09月出生，1997年 09月师从于四川农业大学郑有良教授，于2000年07月获 博士学位。摘要 小麦是世界上的主要粮食作物之一，在农业生产中占 有十分重要的地位。与其它农作物一样，由于在育种中大 量使用一些相同的亲本，导致栽培小麦基因大量流失，使 其遗传基础日益狭窄、遗传变异率低，对其产量和品质的 进一 步改良起着极大的限制作用。虽然在小麦的野生近缘 物种中有许多改良小麦的优异基因，但将这些基因导入到 普通小麦需要特定的一些技术和手段，而且效率较低。现 有栽培品种和地方品种，特别是一些特异材料，是小麦的 初级基因库，其中也含有改良小麦产量和品质所需的一些 优异基因。从小麦的初级基因库向栽培小麦中转移基因不 需要特定的技术和手段。因此，对现有小麦材料和小麦地 方品种的遗传多样性进行深入研究和评价，有助于将其中 的优异基因向小麦背景中转移，增加栽培小麦品种的遗传 多样性。现代分子标记技术的进一步发展和完善，使得人 们能够从分子水平对大量材料进行深入研究，详细揭示其 遗传多样性。本研究利用APA GE、SDS-PAG E、荧光原位杂 交技术（FISH）、RFL P、R、STS-PC R等常规和分子标记方 法，对多小穗小麦新种质10-A，背景中的黑麦染色质及 其对农艺性状的影响、中国特有小麦地方品种中的贮藏蛋 白基因多样性、中国特有小麦地方品种群体间和群体内的 遗传多样性及其遗传关系、中国高抗赤霉病小麦地方品种 间的遗传多样性等几个方面进行研究，取得的主要研究结 果如下： 1?利用APA GE、荧光原位杂交技术（FISH）、PC R和 RFLP标记，对导入黑麦多小穗等性状创制的小麦新种质 “1 0—A，进行了分子检测。APAGE分析发现，TO-A，与其 他易位系一样，含有黑麦1RS的醇溶蛋白标记位点 GldlB3o用黑麦1RS的特异性PCR引物对“10-A，的基因组 DNA进行扩增，发现其也具有黑麦的1RS染色体。以黑麦基 因组总DNA作探针，用中国春基因组DNA做封阻，与”10- A，根尖细胞有丝分裂染色体进行荧光原位杂交，结果表明 黑麦1R染色体的整个短臂（1RS）易位到＜10-A,中。用 25个RFLP标记进行S outhern分析，进一步发现10-A的1 特异性限制片段发生丢失，代之以黑麦1R S的特异性限制 片段，而位于其他染色体上的特异性限制片段未发生缺失。 FISH和RF LP标记同时表明，‘10-A中没有小麦4A-黑麦 4R染色体易位。据此认为，多小穗小麦新种质10-A，属 于易位系。同时，本研究还对10-A，的多小穗改良系进 行了分子检测，发现他们均具有易位染色体。 对几种鉴定小麦背景中的易位染色体的常规方法和 分子标记方法进行比较发现，A PAGE方法是一种快速有效 的方法，最易于在小麦育种选择中应用。 以来源于多小穗小麦新种质10-A，、普通穗型小麦 品系88-1643和川育12号组配的三交组合10-A /8 8- 1643//川育12号的重组系为供试材料，选用4个RFL P标 记和1个醇溶蛋白标记GldlB3分析了易位染色体对农艺性 状和籽粒蛋白质含量、及其性状间的简单相关和偏相关的 影响。结果表明，易位染色体对小麦小穗数、每小穗结实 粒数、千粒重、穗粒重、株高和籽粒蛋白质含量等几个性 状具有显著的影响，而对穗粒数和抽穗期的影响不大。易 位系的平均小穗数、千粒重、穗粒重、株高和籽粒蛋白质 含量分别比非易位系高、、、和，而平均每小穗结实粒数则 低。从农艺性状间的简单相关和偏相关系数来看，一些性 状间的显著简单或偏相关关系仅易位系群体中检测到，而 另一些性状间的显著简单或偏相关关系仅在非易位系群体 间检测到。同时，一些性状间的简单相关系数在易位系和 非易位系群体间的差异性达到显著或极显著水平。这些结 果表明，易位染色体不仅对小麦农艺性状和籽粒蛋白质含 量具有显著的效应，而且对性状间简单相关和偏相关的程 度和性质均有一定的影响。 4?利用APAGE和SDS技术对四川白麦子地方品种、 云南铁壳麦、西藏半野生小麦和新疆稻麦的醇溶蛋白和高 分子谷蛋白亚基进行了分析。结果发现，在89份四川白麦 子地方品种中，共出现35种醇溶蛋白带型和3种高分子谷 蛋白亚基组合，其中2份小麦地方品种的醇溶蛋白带型和 87份小麦地方品种的高分子谷蛋白亚基组合与中国春 一致。在14份云南铁壳麦中，岀现了 8种醇溶蛋白带型和 3种高分子谷蛋白亚基组合。在9份西藏半野生小麦中，出 现了 9种醇溶蛋白带型和4种高分子谷蛋白亚基组合。在9 份新疆稻麦中，出现9种醇溶蛋白带型和5种高分子谷蛋 白亚基，其中1份材料具有Glu-Dl编码的新亚基。 从醇溶蛋白和高分子谷蛋白亚基表型来看