rbbp4在hiv转录与潜伏中的作用及机制研究内科学传染病学专业论文.docxVIP

浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 致谢 博士生涯即将结束，也迎来了论文的付梓之际。五年的科研训练，包含了大 量的心血和汗水，感谢人生中拥有过这么一段宝贵的经历。此时，我心中充满了 激动和万千的感慨，但更多的是感激的心情。 感谢我的导师吴南屏研究员，她在课题的选题、设计和实施的各环节吴老师都 给予了悉心的指导，付出了巨大的心血；吴老师奋发进取的精神风貌、严谨求实的 治学态度、雷厉风行的工作作风、真诚公正的处事原则，使我深受感染，并将 使我受益终生。在我的博士生涯中吴老师在科研和生活中都给了我最大的理解和 支持，师恩永难忘。 感谢李兰娟院士在科研上给予的关怀和支持，作为浙江大学医学院附属第一 医院传染病诊治国家重点实验室主任，李院士不仅为我们提供了一流的科研环境， 更为我们开拓了广阔的国际视野，也使我们在科研的各方面都获得了巨大的收获 和提高。 感谢姚航平研究员，在我的学习工作中，姚老师都给了我无私的帮助，姚老师 扎实深厚的学术素养和真诚朴实的处事态度是我学习的榜样。感谢王英杰研究员、 刘克洲教授、感谢各位老师给予我的关怀和无私帮助。 感谢杨劲师兄、杨宗兴师兄在我的课题进展和生活中给予了极大的指导和帮助， 感谢靳昌忠师兄、卢翔云师兄、吴海波师兄、谢天胜师兄、程林芳、彭晓荣、彭 秀明、刘福民、张晓倩、吴哓鑫、欧会林等，感恩能与大家的陪伴，感谢大家的理 解和帮助。 感谢所有帮助过的我的人。 感谢我挚爱的家人，感谢你们一直默默地理解和支持。 感叹时间短暂，转瞬即逝，五年来留下的是满满的珍贵的记忆，人生总是前 行，感谢研究生生涯能有大家相伴，在此道声珍重，愿大家都有美满人生。 201 6年4月 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 RBBP4在HIV转录与潜伏中的作用及机制研究 浙江大学医学院 内科(传染病学) 导 师 吴南屏 博士研究生 王娟 中文摘要 背景 由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)所导致的艾滋病 是目前最具有威胁性的传染病之一。虽然高效的抗逆转录病毒治疗(highly active anti—retroviraltherapy,HAART)能有效的抑制HIV病毒的复制并使病毒载量降低至 检测下限，但是由于HIV潜伏库的存在，导致HIV不能被彻底清除，因此当前 HIV潜伏库被认为是从体内彻底清除HIV的最后壁垒。HIV潜伏状态本质上是一 种可逆的转录沉默状态，这种状态的产生和维持涉及多种宿主转录抑制因子及表 观修饰复合体。结合在HIV前病毒基因组长末端重复序列5’LTR(10ng terminal repeat)上的宿主转录抑制因子及其募集的组蛋白脱乙酰化酶HDACs(histone deacetylase)等表观修饰复合体在H1V的转录沉默和潜伏的建立维持中起着重要作 用。视网膜母细胞瘤结合蛋白RBBP4(retinoblastomabindingprotein 4)，作为组蛋 白分子伴侣，通过与HDACs等表观修饰复合体协同作用，可参与基因的转录沉默。 但作为与HDACs密切关联的RBBP4分子，它在HIV的转录以及潜伏中的作用还 未见报道。因此，本文将对RBBP4在HIV转录和潜伏中的作用及机制进行研究。 II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 目的 1．研究RBBP4在正常对照者、临床HIV感染者和治疗者外周血单个核细胞 PBMC(peripheral blood mononuclear cells)中的表达变化，并在实验室HIV感染 的CEM．SS和TZM．bl细胞模型上对RBBP4的表达变化进行验证； 2．研究RBBP4表达的改变对HIV产生的作用，并在HIV的转录环节研究 RBBP4对HIV LTR介导的转录调控以及RBBP4与HIV LTR启动子的结合； 3．进一步在HIV的感染和潜伏模型中研究RBBP4对HIV转录和潜伏作用的 机制，为HIV潜伏库的清除提供实验数据及科学依据。 方法 1．首先利用荧光定量PCR检测RBBP4分子在临床HIV感染者(30例)、HIV 治疗者(30例)和健康对照(30例)的PBMCs中的表达变化。并在实验室HIV 感染的CEM．SS和TZM．bl细胞模型上，利用荧光定量PCR、Western blot和免疫 荧光技术，对RBBP4的表达变化进行定性和定量检测。 2．通过双荧光素酶报告系统检测HIVLTR启动转录的萤火虫荧光素酶活性， 来研究RBBP4对HIV LTR启动子的转录调控；利用凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究RBBP4与HIV LTR上NF．1(B(一1 15～一7